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技術(shù)文章(zhāng)
更新(xīn)時間:2023-10-16
點擊次(cì)數:2763
你(nǐ)知(zhī)道(dào)在(zài)蛋白檢測中條帶的(dí)常見問題有哪(nǎ)些(xiē)?該(gāi)如(rú)何解(jiě)決嗎?讓我(wǒ)們一起來看看吧(bā)!
一(yī),條帶(dài)出(chū)現(xiàn)位(wèi)置比預期低或高(gāo)
①當(dāng)條帶出(chū)現位置比預期(qī)低(dī):
原(yuán)因(yīn):目(mù)的蛋白(bái)經(jīng)過剪切或降(jiàng)解,有相(xiāng)同或相似(sì)抗(kàng)原表(biǎo)位的(dí)蛋(dàn)白(bái)被抗(kàng)體檢(jiǎn)測出
解決(jué)辦法(fǎ):樣品準備(bèi)時(shí)候要在(zài)冰上(shàng)操作;加(jiā)入(rù)更(gēng)過蛋(dàn)白(bái)酶(méi)抑製(zhì)劑(jì);更換別(bié)的抗(kàng)體
②當(dāng)條帶(dài)出現位(wèi)置比預期(qī)略(lüè)高:
原(yuán)因1:蛋白可能(néng)被(bèi)糖(táng)基化,或氨(ān)基(jī)酸基被修(xiū)飾
解決(jué)辦(bàn)法(fǎ):使(shǐ)用(yòng)酶去除可(kě)能(néng)的蛋(dàn)白修飾(shì);檢查(chá)抗(kàng)原(yuán)序(xù)列
原因(yīn)2:可(kě)能(néng)有融(róng)合(hé)蛋(dàn)白(bái)
解(jiě)決(jué)辦(bàn)法:查(chá)看(kàn)表達(dá)序列
原因(yīn)3:蛋(dàn)白形成二聚(jù)體或多(duō)聚(jù)體(tǐ)
解(jiě)決辦(bàn)法:加強(qiáng)變(biàn)性(xìng)條(tiáo)件(jiàn)
二,條帶(dài)比(bǐ)較模(mó)糊(hū)
原因:轉(zhuǎn)膜電壓是否(fǒu)過高(gāo);轉(zhuǎn)膜中是否有氣泡殘(cán)留(liú);轉(zhuǎn)膜緩(huǎn)衝(chōng)液組分問(wèn)題
解決辦法:降低轉膜(mó)電壓(yā),重新(xīn)配(pèi)製緩(huǎn)衝(chōng)液,在(zài)電轉(zhuǎn)之前(qián)小(xiǎo)心(xīn)的移除(chú)膜(mó)和(hé)膠之(zhī)間(jiān)的(dí)氣(qì)泡(pào)
三(sān),條帶(dài)分(fēn)布不(bù)均匀(yún)
原(yuán)因:可能(néng)孵育(yù)時(shí)振(zhèn)蕩(dàng)不均(jūn)匀(yún),抗體(tǐ)和封(fēng)閉(bì)液不結合
解決(jué)辦法(fǎ):離心(xīn),分離二抗中(zhōng)的聚合(hé)體,確保孵育(yù)過(guò)程中(zhōng)膜(mó)wan全浸(jìn)沒(méi)在抗體中;孵育時確(què)保震蕩均(jūn)匀(yún),嘗(cháng)試更換封閉(bì)液分離膠聚(jù)合(hé)不(bù)均匀(yún),導致蛋(dàn)白(bái)電泳不(bù)一致(zhì):調(tiáo)整(zhěng)聚(jù)合條(tiáo)件(jiàn),分離(lí)膠(jiāo)溶液混匀後再(zài)進(jìn)行(háng)聚合
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