細(xì)胞(bāo)轉(zhuǎn)染是指將(jiāng)外(wài)源遺傳(chuán)物質（DNA或(huò)RNA）導入真核細胞的(dí)技術(shù)。 細胞(bāo)轉染(rǎn)技術可(kě)分為兩大(dà)類，一(yī)類是(shì)瞬時轉染(rǎn)，一(yī)類(lèi)是(shì)穩定(dìng)轉(zhuǎn)染(rǎn)。那麼你知(zhī)道(dào)影(yǐng)響轉(zhuǎn)染效(xiào)率的因(yīn)素及(jí)注意事(shì)項(xiàng)有(yǒu)什(shí)麼(mó)嗎(má)？讓我(wǒ)們一起來(lái)看看(kàn)吧
！

一，轉染(rǎn)試(shì)劑

不(bù)同(tóng)細胞(bāo)係轉染效(xiào)率通(tōng)常(cháng)不同，因此在轉染實驗(yàn)前(qián)需(xū)要根據(jù)細胞特性選擇合(hé)適(shì)的轉染試劑。可以(yǐ)通(tōng)過已(yǐ)發表文(wén)獻和轉染(rǎn)試劑(jì)提(tí)供(gōng)的已成功轉(zhuǎn)染的細胞(bāo)株來進(jìn)行(háng)選(xuǎn)擇。

二(èr)，細胞(bāo)狀(zhuàng)態(tài)

轉(zhuǎn)染(rǎn)前細胞(bāo)活(huó)力和(hé)總體健(jiàn)康狀況是轉(zhuǎn)染產生變(biàn)異(yì)性的重(zhòng)要(yào)來源。一(yī)般建(jiàn)議(yì)在(zài)轉染前(qián)至(zhì)少24小(xiǎo)時(shí)進(jìn)行傳(chuán)代(dài)培(péi)養(yǎng)，以確(què)保細胞(bāo)在傳(chuán)代(dài)後(hòu)處(chǔ)於轉染(rǎn)的最(zuì)佳生(shēng)理條件(jiàn)，細(xì)胞(bāo)活力大(dà)於 90%。最(zuì)shi合(hé)轉(zhuǎn)染的(dí)細(xì)胞是復(fù)蘇(sū)經(jīng)過幾(jī)次傳代後達(dá)到(dào)指數生長(cháng)期的(dí)細(xì)胞，細(xì)胞生長(cháng)旺盛(shèng)，最(zuì)容(róng)易(yì)轉(zhuǎn)染(rǎn)。為確保轉染的重復性，一(yī)般(bān)選(xuǎn)擇低細(xì)胞(bāo)代次（<30，能確保基因型不(bù)變）。如果發現同一株(zhū)細胞(bāo)轉(zhuǎn)染效(xiào)率(shuài)降低，可以嘗(cháng)試(shì)重(zhòng)新復蘇細胞以恢(huī)復(fù)最(zuì)佳結(jié)果(guǒ)。此外，汙染會(huì)嚴(yán)重(zhòng)影響轉染結果(guǒ)。

匯合度(dù)：轉(zhuǎn)染時(shí)過(guò)高或者過低的細(xì)胞密(mì)度會(huì)導致(zhì)轉染效(xiào)率降低，乃至表(biǎo)達水平(píng)偏(piān)低(dī)。因(yīn)此(cǐ)要根據(jù)具體的(dí)細胞類型(xíng)，應用和(hé)轉染技術，來優化(huà)確定(dìng)相(xiāng)應的最(zuì)佳(jiā)密(mì)度。如(rú)使用(yòng)陽離子(zǐ)脂質體(tǐ)轉(zhuǎn)染(rǎn)時(shí)，貼(tiē)壁細胞一(yī)般(bān)達到 70%-90% 的(dí)匯合度(dù)，懸(xuán)浮(fú)細(xì)胞達到 5 ×10⁵ 至 2 ×10⁶ 個細(xì)胞/mL 的(dí)密度，即可(kě)獲得(dé)良好(hǎo)的(dí)結果。但不(bù)同的轉染(rǎn)試(shì)劑，針(zhēn)對不(bù)同(tóng)細胞係要求(qiú)轉(zhuǎn)染時的最適(shì)細胞密(mì)度(dù)各不(bù)相同，因此(cǐ)使用(yòng)新的細(xì)胞(bāo)係或(huò)者新的轉染(rǎn)試(shì)劑時(shí)，應進行(háng)實驗優化並(bìng)建立(lì)一(yī)個(gè)穩定方法，包(bāo)括適(shì)當的(dí)接種量(liáng)和培養時(shí)間(jiān)等等。不同實驗目的也(yě)會影響(xiǎng)轉染時的鋪(pū)板(bǎn)密度(dù)，比如研(yán)究(jiū)細(xì)胞(bāo)周期(qī)相關(guān)基因等(děng)表達(dá)周期長(cháng)的基因(yīn)，就(jiù)需要(yào)較低的(dí)鋪板密(mì)度(dù)，所(suǒ)以(yǐ)需要選(xuǎn)擇(zé)能夠(gòu)在較(jiào)低鋪(pū)板密度下進行轉(zhuǎn)染的試(shì)劑。

三(sān)，培養基(jī)

不(bù)同的(dí)細(xì)胞(bāo)或細胞類(lèi)型都有非常(cháng)特定(dìng)的培(péi)養基(jī)，血(xiě)清(qīng)，補充劑(jì)要求(qiú)，選擇最(zuì)shi合細胞類(lèi)型的培(péi)養基和轉染方(fāng)法在(zài)轉(zhuǎn)染實(shí)驗中(zhōng)起(qǐ)著非(fēi)常(cháng)重(zhòng)要(yào)的(dí)作用(yòng)。一些細(xì)胞係(xì)和原代細胞可能(néng)需(xū)要特殊的包(bāo)被材料（如多(duō)聚賴氨(ān)酸(suān)，膠(jiāo)原蛋(dàn)白，纖(xiān)連(lián)蛋(dàn)白等(děng)）以(yǐ)附著於培養板(bǎn)並(bìng)獲(huò)得(dé)最(zuì)佳的轉染結(jié)果(guǒ)。

可參(cān)考(kǎo)已發(fā)表(biǎo)文獻(xiàn)或(huò)細胞(bāo)來(lái)源(yuán)處(chǔ)獲(huò)得獲(huò)得(dé)針(zhēn)對(duì)特(tè)定細胞(bāo)類(lèi)型的合適培養(yǎng)基和轉染(rǎn)方(fāng)法(fǎ)，如(rú)果(guǒ)沒有相關信(xìn)息，則需(xū)要根據經驗或(huò)篩(shāi)選實(shí)驗(yàn)確(què)定(dìng)。

四，血清

一般培(péi)養基(jī)中存在血清(qīng)可(kě)增(zēng)強(qiáng) DNA 轉(zhuǎn)染。但使用(yòng)陽(yáng)離(lí)子脂(zhī)質體(tǐ)轉染(rǎn)時(shí)，一些(xiē)血清(qīng)蛋白會幹(gān)擾(rǎo)復合物的(dí)形(xíng)成(chéng)，因此(cǐ)應在(zài)無血(xiě)清(qīng)條件下製備DNA-脂(zhī)質體復合物(wù)。當(dāng)使用 RNA 轉(zhuǎn)染(rǎn)細胞時，建議在無(wú)血清條件下轉染，以避(bì)免潛(qián)在(zài)的(dí)RNase汙染(rǎn)。

五，抗(kàng)生素

一(yī)般用於瞬時轉染的(dí)培(péi)養基中可含抗(kàng)生(shēng)素(sù)。不過，由於陽(yáng)離(lí)子脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)試劑可增(zēng)加細胞(bāo)通(tōng)透性，因(yīn)此(cǐ)也(yě)可能增(zēng)加遞送到細胞(bāo)內的抗(kàng)生素(sù)量，從(cóng)而(ér)導(dǎo)致(zhì)細胞毒性以(yǐ)及較(jiào)低的轉(zhuǎn)染效率。因(yīn)此不建(jiàn)議(yì)在轉(zhuǎn)染培養基中(zhōng)加入(rù)抗生素(sù)。可在(zài)轉染前(qián)鋪板(bǎn)細胞時，使(shǐ)用(yòng)無(wú)抗(kàng)生(shēng)素(sù)的培養基(jī)。

對於(yú)穩(wěn)定轉染，不應(yīng)在選(xuǎn)擇(zé)性培(péi)養基(jī)中(zhōng)使用青黴(méi)素(sù)和(hé)鏈黴素，因為(wéi)這些抗生(shēng)素是 Gibco Geneticin 選擇(zé)性抗(kàng)生素(sù)的(dí)競爭性抑製(zhì)劑。在(zài)構建(jiàn)穩定(dìng)的(dí)細(xì)胞(bāo)係時，在轉染程序(xù)後預留(liú) 48-72 小時供細胞表達抗性基(jī)因，之後再加入選(xuǎn)擇性(xìng)抗(kàng)生(shēng)素。

六，轉染分子類型(xíng)

質(zhì)粒 DNA 是(shì)最chang用的(dí)轉染載體。質粒 DNA 的拓撲結(jié)構(gòu)（綫(xiàn)性或超螺(luó)旋）和大小(xiǎo)會影響(xiǎng)轉染(rǎn)的效率，超(chāo)螺旋(xuán)質(zhì)粒 DNA 瞬時轉(zhuǎn)染(rǎn)的(dí)效(xiào)率(shuài)zui高(gāo)。在(zài)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(rǎn)中，相對於超螺(luó)旋 DNA，雖(suī)然使用綫性(xìng) DNA 會(huì)導致細胞的(dí) DNA 攝(shè)取量(liáng)較(jiào)低(dī)，但 DNA 整(zhěng)合到宿主基因組中的(dí)效(xiào)果(guǒ)更(gēng)優(yōu)。雖然寡(guǎ)核(hé)苷(gān)酸，RNA，siRNA 和蛋白質等其(qí)他大(dà)分(fēn)子也(yě)可以(yǐ)轉染到細胞中，但(dàn)在使用(yòng)這(zhè)些大分子時，需要優(yōu)化轉染條件。

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