查(chá)詢(xún)抗體的時(shí)候(hòu)，發現(xiàn)在抗體(tǐ)應用欄(lán)中，有(yǒu)的抗體適用於(yú)WB，IP，IHC，IF，F，CHIP，而(ér)有(yǒu)的抗體適(shì)用於WB，IHC，IF，F，不適用(yòng)於IP和(hé)CHIP。那麼(mó)你知道WB，IP，IHC，IF，ChIP，FC六(liù)種抗體(tǐ)的(dí)區(qū)別是什麼(mó)？讓我們一起來(lái)看看(kàn)吧(bā)
！

一(yī)，WB

蛋白(bái)質(zhì)印跡(jì)是生(shēng)命(mìng)科學實驗中一項常(cháng)見(jiàn)的分(fēn)子生物(wù)學實驗(yàn)技術，原(yuán)理(lǐ)為利(lì)用電(diàn)泳(yǒng)（SDS-PAGE）分(fēn)離蛋(dàn)白質(zhì)，接著將(jiāng)蛋(dàn)白質轉移(yí)到(dào)膜上，然後利用(yòng)抗(kàng)體(tǐ)進(jìn)行(háng)檢(jiǎn)測的(dí)方(fāng)法(fǎ)，通過分析(xī)條帶(dài)大小(xiǎo)和顯(xiǎn)色信號獲得目(mù)標(biāo)蛋白質(zhì)在(zài)所分(fēn)析的(dí)細胞或(huò)組織(zhī)樣本(běn)表(biǎo)達情(qíng)況的信(xìn)息。由(yóu)於(yú)蛋白質進行電(diàn)泳前(qián)進行(háng)加熱(rè)變性，破壞了保(bǎo)持(chí)蛋(dàn)白(bái)質二級(jí)和三級結(jié)構的(dí)氫(qīng)鍵(jiàn)，並(bìng)使蛋(dàn)白(bái)質綫(xiàn)性化，需使用識(shí)別(bié)綫性(xìng)抗原(yuán)表(biǎo)位的抗體。因(yīn)此(cǐ)WB抗體(tǐ)一(yī)般(bān)采(cǎi)用(yòng)人工合成(chéng)多(duō)肽作為抗原製備(bèi)的抗體(tǐ)。

二，IF/IHC

免疫組(zǔ)化是利(lì)用標記(jì)抗(kàng)體經抗原抗(kàng)體特異性免疫(yì)反(fǎn)應和(hé)化學(xué)/熒(yíng)光呈色(sè)反應(yīng)，對組織或細胞內(nèi)的(dí)抗原(yuán)進(jìn)行研究(jiū)的技術(shù)。免疫組化(huà)檢(jiǎn)測需(xū)要進行(háng)固定，固(gù)定(dìng)可防止(zhǐ)細胞(bāo)脫落，並盡量讓(ràng)細胞(bāo)的(dí)形(xíng)態結(jié)構(gòu)維持(chí)和天(tiān)然(rán)狀態下一致(zhì)，確保(bǎo)組織(zhī)細(xì)胞(bāo)抗原特異性的穩定。但(dàn)化學物(wù)質的固定(dìng)使蛋(dàn)白質變(biàn)性(xìng)凝固(gù)，與天然狀態(tài)下(xià)的(dí)蛋(dàn)白(bái)質結構有一定的(dí)區別，但(dàn)是(shì)又不同於WB中(zhōng)加熱變性變成(chéng)綫(xiàn)性的(dí)結(jié)構(gòu)。

免疫組(zǔ)化抗體識(shí)別的是未經加(jiā)熱變性處理(lǐ)的(dí)抗(kàng)原(yuán)表位，有(yǒu)些(xiē)表位(wèi)是綫性的(dí)，而有的(dí)屬於(yú)構象型(xíng)；綫性表(biǎo)位(wèi)不(bù)受蛋(dàn)白(bái)變(biàn)性的影響，天然(rán)蛋白(bái)和變性後的蛋白(bái)都含有；構(gòu)象型表位(wèi)由(yóu)於(yú)受蛋白空(kōng)間(jiān)結(jié)構限製(zhì)，加熱變性會(huì)消(xiāo)失。因(yīn)此在做(zuò)IF/IHC實(shí)驗(yàn)中，最(zuì)合(hé)適(shì)的(dí)抗(kàng)體可(kě)以(yǐ)是(shì)用重組(zǔ)蛋(dàn)白作為抗(kàng)原製備的(dí)抗體，也(yě)可(kě)以(yǐ)是人(rén)工合成多肽(tài)作(zuò)為抗(kàng)原(yuán)製(zhì)備(bèi)的抗(kàng)體。如果(guǒ)所用(yòng)的(dí)抗(kàng)體識別(bié)的是蛋白上(shàng)連續的(dí)幾個氨基(jī)酸(suān)，也就(jiù)是綫性表(biǎo)位(wèi)，那麼(mó)這(zhè)種(zhǒng)抗體可同(tóng)時(shí)用於(yú)免疫組(zǔ)化和(hé)WB，而如果(guǒ)抗體(tǐ)識別(bié)的是(shì)構象(xiàng)表位，則(zé)隻能(néng)用(yòng)於(yú)免疫(yì)組化(huà)。

三，IP/CHIP

免(miǎn)疫(yì)沉澱（Immunoprecipitation，IP）是利(lì)用抗原抗(kàng)體(tǐ)特異性(xìng)反應純化富集樣品中(zhōng)目(mù)的蛋白(bái)的(dí)一種方法(fǎ)。通(tōng)常使目標(biāo)蛋白(bái)同(tóng)對應抗體-protein A/G形(xíng)成免疫(yì)復合(hé)物沉澱而(ér)得以收集。根(gēn)據不同種(zhǒng)類的檢測目(mù)標，可(kě)以將(jiāng)IP技(jì)術(shù)分(fēn)為(wéi)
：CHIP，RIP，Co-lP。IP富集(jí)蛋(dàn)白，檢測(cè)與其結合的DNA的方(fāng)法(fǎ)即(jí)為(wéi)ChIP；檢測與其(qí)結合(hé)的RNA的方法即為(wéi)RIP；檢(jiǎn)測與其(qí)結(jié)合(hé)的(dí)蛋白的(dí)方(fāng)法(fǎ)即為Co-IP。

免(miǎn)疫沉(chén)澱是用抗(kàng)體(tǐ)去(qù)識別天然狀態下的蛋(dàn)白質(zhì)，因此IP的抗體最(zuì)好使(shǐ)用天然蛋(dàn)白(bái)作為(wéi)抗原製備(bèi)的抗體(tǐ)，也可(kě)以用重(zhòng)組蛋白作為抗(kàng)原製(zhì)備的(dí)抗體(tǐ)。最好不要用人工合(hé)成多(duō)肽作(zuò)為(wéi)抗原製備的(dí)抗體，因為這(zhè)種抗(kàng)體(tǐ)識別的(dí)位點可能(néng)包(bāo)裹(guǒ)在(zài)蛋白(bái)內部(bù)而(ér)無法識別(bié)。CHIP和(hé)IP沒有太大(dà)的區別，唯yi的(dí)問(wèn)題在於，如果(guǒ)抗體(tǐ)識(shí)別的抗(kàng)原表(biǎo)位(wèi)和(hé)該(gāi)蛋白(bái)質(zhì)與(yǔ)DNA結合的部位一(yī)致(zhì)，則會(huì)導(dǎo)致CHIP實驗的失敗。

四，FC

流(liú)式(shì)細胞(bāo)是(shì)以(yǐ)免疫熒光技術(shù)為(wéi)基(jī)礎而發(fā)展起(qǐ)來的一(yī)種(zhǒng)專門的(dí)細胞分析技術，主要(yào)用於細胞分(fēn)析(xī)和分(fēn)選(xuǎn)。流式細(xì)胞中分為兩(liǎng)種(zhǒng)，一(yī)種(zhǒng)是(shì)活(huó)細胞的(dí)流(liú)式，這種(zhǒng)流(liú)式最(zuì)好(hǎo)采(cǎi)用天然蛋白(bái)作為抗(kàng)原(yuán)製(zhì)備的(dí)抗體(tǐ)或者用(yòng)重組蛋白作(zuò)為(wéi)抗原製(zhì)備的(dí)抗(kàng)體，另外一種是(shì)經(jīng)過固(gù)定之後的流式，和(hé)IF/IHC 所用(yòng)抗(kàng)體一致(zhì)。

在(zài)流式細(xì)胞(bāo)中，分為直(zhí)接標記和間(jiān)接(jiē)標記(jì)，間接標記(jì)不如直接(jiē)標(biāo)記真實準(zhǔn)確。因(yīn)此(cǐ)選擇流(liú)式抗(kàng)體要采用(yòng)帶有(yǒu)熒光(guāng)標(biāo)記的一(yī)抗；如(rú)果研(yán)究的蛋白沒(méi)有直(zhí)接(jiē)標記(jì)的一抗(kàng)，那(nà)麼(mó)就采用(yòng)間(jiān)接標記(jì)抗體(tǐ)，需(xū)同時使(shǐ)用(yòng)可識別靶標(biāo)抗原一抗和(hé)偶聯(lián)熒光(guāng)染(rǎn)色(sè)的二抗。

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