了解(jiě)或(huò)者做(zuò)過(guò)Western Blot的同(tóng)學都(dū)應(yīng)該(gāi)清楚(chǔ)，經過(guò)電泳分(fēn)離後的蛋白質(zhì)樣(yàng)品(pǐn)需經過“轉(zhuǎn)膜(mó)"步驟，將蛋(dàn)白從(cóng)PAGE膠轉(zhuǎn)移到(dào)膜上進(jìn)行固定後，才能(néng)進行後(hòu)續各種方法(fǎ)的Western Blot的檢測。Western Blot中膜的(dí)選(xuǎn)擇(zé)是實(shí)驗成(chéng)功(gōng)的關鍵(jiàn)點，實(shí)驗(yàn)中一般可(kě)以選擇硝酸(suān)纖維素膜(NC) 和(hé)PVDF膜，PVDF膜結(jié)合能力強且(qiě)具有較強的機(jī)械強度，可以重復(fù)使用。那(nà)麼(mó)你(nǐ)知(zhī)道該如(rú)何(hé)使用PVDF膜嗎(má)？讓(ràng)我(wǒ)們一(yī)起來(lái)看看吧！

一，何為(wéi)PVDF膜(mó)？如(rú)何選擇PVDF膜?

PVDF膜即聚偏二氟乙(yǐ)烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白質印跡法中常用的一種固相支持(chí)物(wù)。PVDF膜是疏水性(xìng)的(dí)，膜孔(kǒng)徑有大有(yǒu)小，隨(suí)著膜(mó)孔(kǒng)徑的不斷(duàn)減(jiǎn)小(xiǎo)，膜對低分(fēn)子(zǐ)量的蛋白(bái)結(jié)合就(jiù)越(yuè)牢固。大(dà)於20KDa的蛋白選用(yòng)0.45μm的膜，小於20KDa的蛋白選(xuǎn)用0.2μm的膜。

二，PVDF膜使用(yòng)時要用(yòng)甲醇浸泡(pào)嗎？

PVDF膜在(zài)使用時需(xū)要(yào)進(jìn)行(háng)預處理，用甲醇處(chǔ)理的目的就(jiù)是(shì)活化膜(mó)上的(dí)正電基團，使(shǐ)其更(gēng)容(róng)易與帶負電(diàn)的(dí)蛋(dàn)白結合。PVDF膜本質是(shì)一種疏(shū)水性的(dí)聚(jù)合物(wù)，在水溶液中(zhōng)不會浸濕。為了在(zài)水性緩衝液和(hé)係(xì)統中(zhōng)使用PVDF膜，首先(xiān)必須(xū)將其浸(jìn)泡(pào)在50%(v/v)或更高濃度的醇溶(róng)液(yè)中。甲(jiǎ)醇，乙(yǐ)醇和異(yì)丙醇(chún)都(dū)適合浸泡(pào)這種膜(mó)。

三，如何(hé)確定(dìng)PVDF膜轉(zhuǎn)膜成功(gōng)

可以(yǐ)采用(yòng)染(rǎn)色(sè)法(fǎ)來(lái)確定轉(zhuǎn)膜是否成(chéng)功(gōng)，PVDF膜(mó)染料分2類，可逆染(rǎn)料和不可逆(nì)染(rǎn)料(liào)。

可逆染料在(zài)評估印跡(jì)之後可(kě)被(bèi)從膜上洗(xǐ)掉(diào)。這(zhè)些操作(zuò)不(bù)幹(gān)擾(rǎo)後續(xù)的免(miǎn)疫檢測或(huò)印跡上(shàng)蛋白的其它(tā)分(fēn)析。zui常用(yòng)的(dí)可逆(nì)蛋白染(rǎn)料是麗春紅(hóng)。可逆染(rǎn)料的(dí)主要(yào)缺點(diǎn)在於(yú)它(tā)們的(dí)靈敏度低(dī)於不可(kě)逆染料(liào)，但是在(zài)大部分情況下並不影(yǐng)響(xiǎng)使用。

不可逆染料通(tōng)常表現(xiàn)出(chū)最(zuì)佳(jiā)的(dí)靈敏度(dù)，但(dàn)會幹(gān)擾(rǎo)或阻(zǔ)止(zhǐ)蛋白(bái)的(dí)進一步(bù)分析。不可逆染(rǎn)料(liào)有氨基黑和(hé)考馬斯亮藍等。

四(sì)，PVDF膜的保(bǎo)存

在WB曝(pù)光(guāng)結束後仍需(xū)要(yào)保存膜(mó)以(yǐ)便後(hòu)續使用，膜(mó)的保(bǎo)存(cún)條件是(shì)由(yóu)與膜(mó)結(jié)合的蛋白的(dí)穩(wěn)定性(xìng)決(jué)定的。盡(jìn)管(guǎn)PVDF是一種(zhǒng)化學耐(nài)受性好的(dí)聚(jù)合(hé)物，有著(zhuó)出(chū)色的長期(qī)穩定性(xìng)。但是我們還(huán)是建議低溫保(bǎo)存，當(dāng)然(rán)室(shì)溫對於(yú)一(yī)些蛋白(bái)也是可(kě)以的。PVDF膜在4℃下最多保(bǎo)存2周，-20℃下最多2個月，-70℃下可(kě)以長(cháng)期保(bǎo)存。

注(zhù)意(yì)：保存(cún)在(zài)冰箱冷(lěng)凍室的印跡(jì)膜(mó)不能受到機械(xiè)衝擊，這(zhè)會導(dǎo)致(zhì)膜破(pò)損(sǔn)。印跡(jì)膜應恢(huī)復到室溫(wēn)後才(cái)從(cóng)塑料(liào)袋中取出(chū)。印跡(jì)膜也(yě)可放(fàng)在塑(sù)料袋中置於(yú)4℃，但應加(jiā)入疊氮化na等殺(shā)菌劑(jì)，以(yǐ)防(fáng)止細菌(jūn)生(shēng)長(cháng)。在使用之(zhī)前必須徹di洗掉(diào)疊(dié)氮(dàn)化物，以(yǐ)免抑製HRP的(dí)活(huó)性。

更(gēng)多(duō)有關PVDF膜(mó)的使用問題(tí)，請聯係天(tiān)津(jīn)益元利康生物科(kē)技有限公(gōng)司(sī)。