細胞凍存是(shì)指將細(xì)胞放在低(dī)溫(wēn)環境，以(yǐ)達(dá)到(dào)減(jiǎn)少細(xì)胞代(dài)謝(xiè)的(dí)作(zuò)用，從(cóng)而達(dá)到對細(xì)胞進行長(cháng)期(qī)儲(chǔ)存(cún)進行保(bǎo)種的目(mù)的，以供(gōng)後(hòu)續實驗或臨床使(shǐ)用。那麼你知道細(xì)胞凍存(cún)的原(yuán)理(lǐ)是(shì)什麼嗎(má)？讓(ràng)我們一(yī)起來看看吧！

一，細(xì)胞凍(dòng)存原理(lǐ)

1. 當(dāng)溫度低(dī)至-70℃時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的(dí)酶活性(xìng)全部停止(zhǐ)，代(dài)謝活(huó)動停止，故實(shí)現長期保(bǎo)存(cún)的目(mù)的(dí)。

2. 隨著溫(wēn)度(dù)降(jiàng)低，細(xì)胞內外的水分都會(huì)結晶，所形(xíng)成(chéng)的冰晶會造(zào)成細胞膜(mó)和細(xì)胞器(qì)的破(pò)壞(huài)，從而(ér)引起細胞(bāo)死(sǐ)亡(wáng)，特別是(shì)0~-20℃的階段(duàn)，冰(bīng)晶(jīng)呈針狀，及其(qí)引發細胞損傷。在(zài)不加任(rèn)何保(bǎo)護劑(jì)條件(jiàn)下直接凍存細胞時(shí)，細胞內(nèi)和外環(huán)境中(zhōng)的水都會(huì)形成(chéng)冰晶，能導致細(xì)胞內(nèi)發生機械損(sǔn)傷，電解質升高，滲(shèn)透壓(yā)改(gǎi)變，脫水，pH改變，蛋白變性等(děng)，能(néng)引起(qǐ)細(xì)胞死亡。

3. 常(cháng)見(jiàn)的冷凍保護劑(jì)是甘油或二(èr)甲基亞碸（DMSO）。DMSO能快速穿透(tòu)細胞膜進(jìn)入(rù)細胞，降低冰點，延緩(huǎn)凍(dòng)存過程(chéng)，同時增加(jiā)細(xì)胞膜(mó)的(dí)通(tōng)透(tòu)性(xìng)，提高細胞內離子濃度(dù)，減少細(xì)胞(bāo)內冰(bīng)晶的形(xíng)成，從而達(dá)到保護(hù)細(xì)胞(bāo)的目的(dí)。

二，保(bǎo)護(hù)劑的選(xuǎn)擇(zé)

1. 細胞(bāo)凍(dòng)存中， 一般(bān)使用(yòng)DMSO 作(zuò)為保(bǎo)護(hù)劑。在(zài)細胞(bāo)凍存(cún)中(zhōng)， DMSO 使用(yòng)的(dí)最終濃(nóng)度(dù)一般(bān)是 5-15% ，某種具(jù)體細胞(bāo)的凍(dòng)存液(yè)中(zhōng)的(dí)DMSO濃度可以從(cóng)ATCC查到。

2. 對特別敏(mǐn)感的細(xì)胞在凍存(cún)時(shí)需(xū)測(cè)試適(shì)用的(dí)凍(dòng)存(cún)液。例如(rú)神經(jīng)元細胞凍存(cún)時需選擇無(wú)血清(qīng)凍存(cún)液，避(bì)免復(fù)蘇後分化。

三(sān)，細胞(bāo)凍存(cún)的(dí)最佳(jiā)時(shí)期

1. 用來凍存(cún)的細胞(bāo)一(yī)般選(xuǎn)擇在(zài)細(xì)胞(bāo)對數生(shēng)長期(qī)，匯(huì)合度(dù)約(yuē) 90% 的時(shí)候(hòu)，這時(shí)細胞生長狀(zhuàng)態(tài)好(hǎo)，細胞(bāo)數量也(yě)多(duō)，並(bìng)且在收(shōu)獲細胞(bāo)前 24 小時換一次(cì)培養液。

2. 對培養(yǎng)物進行微生物汙染(rǎn)物(wù)檢(jiǎn)測，特(tè)別是支(zhī)原體(tǐ)，確(què)保細(xì)胞沒有(yǒu)任(rèn)何的(dí)汙(wū)染(rǎn)。在(zài)細(xì)胞的收(shōu)集過(guò)程(chéng)中(zhōng)，實(shí)驗(yàn)操作(zuò)要(yào)盡(jìn)可(kě)能的(dí)溫(wēn)和(hé)，避(bì)免細胞受損。

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