EZBioscience® microRNA逆轉錄(lù)試(shì)劑盒采(cǎi)用一步法中(zhōng)的Poly（A）拖(tuō)尾反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄反(fǎn)應方(fāng)法(fǎ)合成(chéng)miRNA的(dí)第一(yī)鏈cDNA。通(tōng)過使(shǐ)用(yòng)大腸杆菌Poly（A）聚合(hé)酶(méi)通(tōng)過(guò)添(tiān)加Poly（A）來延長成熟轉錄本的(dí)3' 端，修飾(shì)來自(zì)總RNA的成熟(shú)miRNA。然後(hòu)，修飾的miRNA使(shǐ)用Oligo（dT）通用標簽(qiān)引(yǐn)物進行通(tōng)用逆(nì)轉(zhuǎn)錄(lù)，以合成所有(yǒu)miRNA的(dí)第(dì)一(yī)鏈cDNA。其(qí)中，gDNA Remover主(zhǔ)要包括(kuò)濃(nóng)縮的(dí)DNase和(hé)緩衝(chōng)液(yè)。隻需(xū)在室(shì)溫(wēn)（19~27°C）下(xià)反(fǎn)應(yīng)5分鐘(zhōng)即可降(jiàng)解95%以上的(dí)殘(cán)留(liú)基因組DNA，大大(dà)降低了(liǎo)對結果(guǒ)的幹(gān)擾(rǎo)。

miRNA RT 酶混合物主要包含(hán)大腸(cháng)杆(gān)菌(jūn) Poly（A）聚合酶(méi)
，逆轉(zhuǎn)錄(lù)酶(méi)和(hé) RNase 抑製(zhì)劑。大腸(cháng)杆(gān)菌(jūn)Poly（A）聚合酶不僅具(jù)有高(gāo)效(xiào)的Poly（A）拖(tuō)尾反應效率，而且特異(yì)性識別(bié)成(chéng)熟(shú)的單鏈miRNA，從而(ér)避免了雙(shuāng)鏈結構(gòu)miRNA前體(tǐ)的(dí)逆(nì)轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。突變體(tǐ)M-MLV逆轉錄(lù)酶具有很強的抗幹(gān)擾(rǎo)能力和擴增能(néng)力。

4×miRNA RT緩衝液試劑(jì)包(bāo)含Poly（A）拖(tuō)尾(wěi)反應和逆(nì)轉(zhuǎn)錄反應的所(suǒ)有(yǒu)原料和(hé)引(yǐn)物，包(bāo)括(kuò) Oligo（dT）-通(tōng)用標(biāo)簽引(yǐn)物
，緩衝液(yè)和(hé)dNTP，並(bìng)經過(guò)精心優(yōu)化，確(què)保(bǎo) Poly（A）拖尾(wěi)反應和(hé)逆轉錄反應(yīng)高(gāo)效(xiào)。

1.操(cāo)作快(kuài)速簡單：本(běn)試劑(jì)盒采(cǎi)用Poly（A）拖尾反(fǎn)應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄反應法一步法合(hé)成miRNAs第一(yī)鏈cDNA。無需設(shè)計(jì)額外的(dí)逆轉錄(lù)引(yǐn)物。30 分鐘內即(jí)可獲得包(bāo)含所有(yǒu) miRNA 的高質量(liáng) cDNA。

2.特異(yì)性高(gāo)：Poly（A）聚合酶(méi)不(bù)僅具有(yǒu)較高的(dí)A-tailing效率，而且特異性(xìng)識別成(chéng)熟(shú)的單鏈(liàn)miRNA，從而(ér)避(bì)免(miǎn)了(liǎo)雙鏈結(jié)構miRNA前體(tǐ)的逆轉錄反(fǎn)應(yīng)。

3.高(gāo)效(xiào)：該(gāi)試劑(jì)盒(hé)采用高效Poly（A）聚(jù)合(hé)酶和逆轉錄(lù)酶(méi)的(dí)優(yōu)化組(zǔ)合(hé)，可(kě)高效進行Poly（A）拖尾(wěi)和逆(nì)轉(zhuǎn)錄(lù)反應(yīng)。與(yǔ)普通商業逆(nì)轉(zhuǎn)錄(lù)產品相比(bǐ)，該試(shì)劑盒(hé)以最(zuì)小的(dí)定量CT值(zhí)逆(nì)轉cDNA，具有優異(yì)的逆(nì)轉錄(lù)效率(shuài)。

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