百奧醫藥(yào)骨組(zǔ)織解離(lí)試劑(jì)盒(hé)可用於(yú)骨(gǔ)組織(zhī)樣本(běn)單(dān)細(xì)胞(bāo)懸液製(zhì)備(bèi)，可(kě)廣(guǎng)泛應(yīng)用於(yú)高(gāo)通量(liáng)單(dān)細(xì)胞(bāo)測序等相(xiāng)關(guān)科學(xué)研(yán)究實驗。那(nà)麼(mó)你(nǐ)知(zhī)道(dào)百奧(ào)醫(yī)藥(yào)骨組(zǔ)織(zhī)解(jiě)離試(shì)劑盒的使用方(fāng)法是什麼(mó)嗎？讓(ràng)我(wǒ)們一(yī)起來看(kàn)看吧！

一(yī)，使用方法(fǎ)：

1，用滅菌(jūn)的剪刀或手(shǒu)術剪將(jiāng)組織切成小塊(kuài)

2，在冰(bīng)上(shàng)將組(zǔ)織塊(kuài)兒加入適(shì)當(dāng)的(dí)RPMI 1640培養基(jī)或(huò)PBS緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)，清洗(xǐ)至(zhì)少3次(cì)，去(qù)除多餘(yú)xue漬和雜(zá)質

3，將(jiāng)洗(xǐ)幹淨的(dí)組織(zhī)剪碎(suì)，剪(jiǎn)的越碎越好，增大和消(xiāo)化試(shì)劑(jì)接(jiē)觸的麵(miàn)積(jī)。加(jiā)入(rù)適(shì)量(liáng)的消化(huà)試劑。顛(diān)倒混匀(yún)。

4，放(fàng)置於(yú)酶作(zuò)用(yòng)的最(zuì)佳溫度下(xià)，一般(bān)37°C，進行(háng)孵育，每(měi)隔5分鐘(zhōng)震蕩混匀。

5，不同類型(xíng)，狀(zhuàng)態的組織消(xiāo)化(huà)時間不(bù)同(tóng)，每隔(gé)一定(dìng)的時(shí)間質(zhì)檢(jiǎn)一次細(xì)胞懸液(yè)，根(gēn)據(jù)細(xì)胞總量(liáng)及活性等確定(dìng)消化(huà)停(tíng)止時間(jiān)。對於某些腫(zhǒng)瘤組織或(huò)其他(tā)較(jiào)致(zhì)密(mì)結締組(zǔ)織，消化時(shí)間(jiān)4~48h，對(duì)於(yú)容(róng)易消(xiāo)化的(dí)組織可以(yǐ)采(cǎi)用37°C 消化(huà)15-45分(fēn)鐘，也(yě)可以(yǐ)根(gēn)據(jù)具體(tǐ)情況而定。如組織(zhī)塊(kuài)已(yǐ)分(fēn)散而失(shī)去(qù)塊的(dí)形(xíng)狀，一經(jīng)搖動即成(chéng)細胞團或單(dān)個(gè)細(xì)胞，可以認(rèn)為(wéi)已消(xiāo)化充分(fēn)。

6，消(xiāo)化完(wán)成後(hòu)，用(yòng)合(hé)適的(dí)細胞(bāo)篩(shāi)進行過濾，收集濾液。

7，讓細胞沉(chén)降(jiàng)並倒出多餘(yú)的含酶液(yè)體(tǐ)。

8，用PBS緩衝液洗滌並(bìng)重復2-3次。加(jiā)入適當(dāng)的(dí)培(péi)養基或(huò)緩(huǎn)衝液，重(zhòng)懸細(xì)胞。

9，用(yòng)細(xì)胞計數儀對細(xì)胞懸(xuán)液進行(háng)質控並記(jì)錄

二，測試效果(guǒ)

使用該(gāi)組織解離(lí)試劑(jì)盒將新鮮人(rén)骨(gǔ)組織消化(huà)解離為單(dān)細胞(bāo)懸液，利用(yòng)CountStar全(quán)自動細胞(bāo)熒(yíng)光分析(xī)儀(yí)檢(jiǎn)測細胞活性（AO/PI染(rǎn)色），結團率，活細胞濃度，細胞直徑等(děng)參數。然後(hòu)進行(háng)10x Genomics平(píng)台(tái)單細(xì)胞建庫(kù)測序，獲取(qǔ)數(shù)據。

製(zhì)備的(dí)單(dān)細(xì)胞(bāo)懸(xuán)液(yè)質(zhì)量(liáng)較(jiào)高，活性(xìng)可達(dá)83.85%，結團(tuán)率僅為3.35%，其他(tā)參(cān)數也均(jūn)能(néng)滿足高通量單(dān)細(xì)胞測(cè)序研究相關(guān)實驗要求。

從曲綫圖(tú)，捕(bǔ)獲(huò)細胞數(shù)，測序深度，獲(huò)得基因(yīn)數(shù)結(jié)果初步可以看出，數據(jù)結果比(bǐ)較(jiào)理想(xiǎng)，例(lì)如(rú)基因中(zhōng)位數(shù)均在1,400個左右，較(jiào)為理想。

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