磷酸(suān)化(huà)蛋白(bái)對細(xì)胞通路的(dí)重(zhòng)要性(xìng)毋(wú)庸(yōng)贅述(shù)，這(zhè)種關鍵的(dí)翻譯(yì)後(hòu)修飾(shì)參wako預製(zhì)膠與wako預製(zhì)膠廣泛(fàn)的細(xì)胞活(huó)動(dòng)調節(jié)，包(bāo)括細(xì)胞周(zhōu)期，細胞(bāo)分(fēn)化(huà)，代(dài)謝(xiè)和神(shén)經(jīng)元通訊等。蛋白磷酸(suān)化的(dí)異(yì)常也(yě)與眾多疾(jí)病相關，是疾病機理研究的重(zhòng)要(yào)研究(jiū)方(fāng)向(xiàng)。那(nà)麼(mó)你(nǐ)知道磷(lín)酸化蛋白研(yán)究方(fāng)法嗎(má)？讓我(wǒ)們一(yī)起來(lái)看(kàn)看吧(bā)！

    Western Blot是(shì)評估(gū)蛋(dàn)白磷酸(suān)化狀態(tài)的常用方法，且(qiě)大部(bù)分(fēn)實驗室具備開(kāi)展(zhǎn)該實(shí)驗的條件。用SDS-PAGE分離生物(wù)樣(yàng)品，隨後轉移到膜（PVDF或硝(xiāo)酸纖維素(sù)膜），采用(yòng)磷酸(suān)化(huà)抗體鑒(jiàn)定目的(dí)蛋白的磷酸(suān)化水平。

    由於(yú)磷(lín)酸化蛋白的檢(jiǎn)測結(jié)果可能隨(suí)樣(yàng)本(běn)處理或操作誤差(chà)而變(biàn)化，研(yán)究人員通(tōng)常(cháng)用(yòng)同(tóng)一種蛋白的(dí)總表(biǎo)達(dá)水平作(zuò)為(wéi)參考(kǎo)，通過確定(dìng)磷酸化蛋(dàn)白(bái)和總(zǒng)蛋(dàn)白的相對比值(zhí)來反映磷酸化(huà)情況(kuàng)，判(pàn)斷信號通路(lù)是否(fǒu)被(bèi)激活。

    SuperSep™Phos-tag™是(shì)一(yī)種預製膠，預先(xiān)加入50μmol/L的(dí)Phos-tag™Acrylamide，打(dǎ)開包裝即(jí)可直接使用。預製膠中含(hán)有(yǒu)Zn²+作為(wéi)金屬(shǔ)離子(zǐ)，在中性凝膠緩衝(chōng)液(yè)中(zhōng)保存穩(wěn)定性(xìng)很好，得(dé)到的結(jié)果條帶也很(hěn)整(zhěng)齊(qí)。wako預製(zhì)膠(jiāo)即(jí)開(kāi)即(jí)用，使(shǐ)用(yòng)起(qǐ)來安全(quán)可(kě)靠，有(yǒu)效(xiào)期(qī)長達6個月，操(cāo)作方法與(yǔ)普通無二。

SuperSep™Phos-tag™預(yù)製(zhì)膠的應(yīng)用

電泳條(tiáo)件(jiàn)：30mA(恒(héng)流(liú)),60 min

樣(yàng)品(pǐn)：5μg/Laneα-酪(lào)蛋(dàn)白(bái)(含磷酸化與(yǔ)去(qù)磷(lín)酸(suān)化(huà)a-酪蛋白(bái))

普通(tōng)SDS-PAGE隻觀察到一條條帶，而Phos-tag™ SDS-PAGE裏可見α酪(lào)蛋(dàn)白磷酸化和α-酪蛋(dàn)白(bái)去磷酸(suān)化兩條條帶(dài)。

樣(yàng)品(pǐn)緩衝液：Sample Buffer Solution(2ME+)(X4)

電(diàn)泳(yǒng)緩衝(chōng)液(yè)：SDS-PAGE緩衝液(yè)，pH8.5

染色：QUICK-CBB PLUS

  P10%(左):SuperSep Phos-tag™(50 μmol/L),10%,13 well

  P15%(中(zhōng)):SuperSep Phos-tag™(50 μmol/L),15%,13 well

  A15%(右):SuperSep™ Ace,15%,13well(不含(hán)Phos-tag™)

更(gēng)多(duō)有關(guān)磷酸(suān)化蛋白研究方(fāng)法(fǎ)之wako預製(zhì)膠，請(qǐng)聯(lián)係天(tiān)津益(yì)元利康(kāng)生物(wù)科(kē)技(jì)有(yǒu)限公(gōng)司。