Phos-tag™是一種可(kě)特異(yì)性捕獲磷酸化(huà)Ser，Thr，Tyr等物質(zhì)的功(gōng)能分子，由(yóu)日本廣島(dǎo)大(dà)學大學院醫(yī)齒藥(yào)學綜(zōng)合(hé)研(yán)究(jiū)科醫學品分子(zǐ)機(jī)能(néng)科學研(yán)究室開(kāi)發(fā)。以(yǐ)Phos-tag™ 丙烯(xī)酰胺（Phos-tag™ Acrylamide）為首(shǒu)開發(fā)的(dí)多種Phos-tag™ 產(chǎn)品被應用於世界(jiè)範(fàn)圍內(nèi)的(dí)基(jī)礎研(yán)究(jiū)，並且在GPCR通(tōng)路及(jí)Wnt通路的信號(hào)轉導(dǎo)分析(xī)方麵也取得了優(yōu)秀成果(guǒ)。

一(yī)，分(fēn)離磷酸化蛋(dàn)白(bái)

在(zài)製備SDS-PAGE預製(zhì)膠過(guò)程中(zhōng)加入Phos-tag™ Acrylamide，即可根(gēn)據磷(lín)酸化水平和(hé)磷(lín)酸(suān)化位(wèi)點分離(lí)磷酸(suān)化蛋白(bái)與非磷(lín)酸化(huà)蛋白(bái)。

原(yuán)理：

1. 電(diàn)泳中的(dí)磷酸(suān)化蛋白(bái)捕獲2個(gè)二價金屬離子。

2. 磷酸(suān)化(huà)水平(píng)越高(gāo)電(diàn)泳速(sù)度越慢。

3. 根(gēn)據(jù)磷酸化(huà)水平(píng)進行分離。（即使磷酸化(huà)位點的數目相(xiāng)同，但隻(zhī)要(yào)位置(zhì)不同(tóng)就能分(fēn)離）

特點：

可檢(jiǎn)測(cè)市售抗(kàng)磷酸(suān)化(huà)抗(kàng)體無(wú)法檢測的磷酸(suān)化蛋白。

可檢(jiǎn)測磷(lín)酸(suān)化水(shuǐ)平及磷酸(suān)化位(wèi)點(diǎn)。

可同時(shí)檢測(cè)磷酸化(huà)與非磷(lín)酸(suān)化(huà)

二，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

①α-casein去磷酸(suān)化(huà)反應(yīng)隨時間的(dí)變(biàn)化(huà)

使用鹼(jiǎn)性磷(lín)酸(suān)酶隨時間(jiān)（孵育時間：0-120 min）處理α-casein，並使用(yòng)Phos-tag™ SDS-PAGE和常規SDS-PAGE分離去(qù)磷(lín)酸化處(chǔ)理的樣(yàng)品(pǐn)。

② 野生型/突(tū)變型Noxa表(biǎo)達(dá)的MCL-1磷酸(suān)化水平變化(huà)

使(shǐ)野生(shēng)型（wt）及突變型（3E，KR，5A）的(dí)Noxa在肺小(xiǎo)細胞癌(ái)細胞(bāo)株(zhū)H209細(xì)胞中(zhōng)表達，並進(jìn)行細(xì)胞溶質（Cytosol）組分(fēn)和HM（Heavy Membrane，含綫(xiàn)粒體較多(duō)）組(zǔ)分(fēn)分離(lí)。通過Phos-tag™ SDS-PAGE分離(lí)出樣品中的MCL-1（40 kDa），使用(yòng)抗(kàng)MCL-1抗(kàng)體(tǐ)進行(háng)Western blotting檢測(cè)。

③二(èr)維(wéi)電泳(yǒng)中的(dí)應(yīng)用： hnRNP K異(yì)構體(tǐ)的(dí)磷酸化(huà)分析

●檢測磷酸化蛋白

Phos-tag™ Biotin

Phos-tag™ Biotin是(shì)Phos-tag™ 分(fēn)子(zǐ)與生物素結合的(dí)產品，無(wú)需(xū)使(shǐ)用抗磷酸化(huà)抗(kàng)體(tǐ)即可檢測與PVDF膜(mó)上(shàng)的磷酸化(huà)蛋白。本產品進(jìn)需(xū)配合(hé)“HRP 結合(hé)親和素(sù)"進行(háng)使用。

特點

1. 結(jié)合與(yǔ)磷酸化種類無關

2. 推薦(jiàn)用於檢(jiǎn)測(cè)無(wú)合適(shì)的(dí)抗(kàng)磷(lín)酸化抗(kàng)體(tǐ)的蛋(dàn)白(bái)

●Phos-tag™ 凝膠熒(yíng)光染(rǎn)料(liào)

Phos-tag™ 凝(níng)膠(jiāo)熒(yíng)光染料，是一種可(kě)在(zài)生理(lǐ) pH 範(fàn)圍(wéi)內，對(duì)凝(níng)膠(jiāo)中的磷酸化蛋白進行染(rǎn)色的熒(yíng)光染料。進行SDS-PAGE後(hòu)，用(yòng)本產(chǎn)品處理聚丙(bǐng)烯酰胺凝(níng)膠，可(kě)以對(duì)磷酸化蛋白(bái)進(jìn)行特(tè)異性染(rǎn)色。本係(xì)列(liè)有(yǒu)波長不(bù)同的Yellow（黃(huáng)），Magenta（品(pǐn)紅(hóng)），Cyan（藍(lán)綠(lǜ)），Aqua（淺(qiǎn)綠）四(sì)種顏色。每管(guǎn)規格為(wéi)0.2 mg，可(kě)對(duì)約20個迷你凝膠(jiāo)進(jìn)行(háng)染色(sè)。

使用(yòng)Phos-tag™ 熒光(guāng)凝膠(jiāo)染色，篩選(xuǎn)組氨酸激酶(méi)抑(yì)製(zhì)劑(jì)。結果表明，激酶抑(yì)製(zhì)劑對(duì)磷酸(suān)化存(cún)在濃度依賴性抑(yì)製。

天(tiān)津益元利(lì)康(kāng)生物科技(jì)有(yǒu)限(xiàn)公司(sī)，代理(lǐ)Wako磷(lín)酸(suān)化蛋(dàn)白分(fēn)析用(yòng)——Phos-tag™ 係列(liè)產(chǎn)品，歡迎(yíng)選購！