檢測相關細胞(bāo)的生理活(huó)性(xìng)是掌握生(shēng)物體(tǐ)骨(gǔ)代謝(xiè)狀態的有(yǒu)效方(fāng)法(fǎ)。骨組(zǔ)織使(shǐ)用(yòng)鹼(jiǎn)性(xìng)磷(lín)酸(suān)酶（ALP）進行染色(sè)可明(míng)確成(chéng)骨(gǔ)細(xì)胞的(dí)成(chéng)骨潛(qián)能，使用(yòng)抗酒石(shí)酸酸性磷酸酶（TRAP）染(rǎn)色可(kě)明確破骨細(xì)胞的骨(gǔ)吸收(shōu)能力(lì)。並(bìng)且在(zài)同(tóng)一(yī)切片上進行(háng)二重染(rǎn)色時(shí)，可同時識別二者

       正(zhèng)常(cháng)的骨代(dài)謝是(shì)通過成骨細胞生(shēng)長與破骨(gǔ)細胞建立骨吸收而維持(chí)平衡。成骨(gǔ)細(xì)胞的(dí)標(biāo)記酶是鹼(jiǎn)性(xìng)磷(lín)酸酶（ALP）。破骨(gǔ)細胞(bāo)的標記(jì)酶是抗(kàng)酒(jiǔ)石酸(suān)酸(suān)性磷(lín)酸酶(méi)（TRAP）。這(zhè)兩(liǎng)種(zhǒng)標記(jì)酶(méi)在(zài)組織切片或(huò)者培養細胞過(guò)程中(zhōng)，被作為成(chéng)骨(gǔ)細(xì)胞
，破骨細胞存在的(dí)標記(jì)指標(biāo)。

       TRAP/ALP破骨(gǔ)成骨雙重染色(sè)試劑盒可通過骨組織切(qiē)片以(yǐ)及(jí)培(péi)養(yǎng)細(xì)胞中(zhōng)TRAP/ALP酶(méi)活(huó)性(xìng)進(jìn)行(háng)組織染(rǎn)色(sè)。通(tōng)過觀察成(chéng)骨(gǔ)細胞和破(pò)骨細(xì)胞(bāo)的(dí)染色(sè)成像，可檢查(chá)細胞的分(fēn)化狀(zhuàng)態(tài)和(hé)骨組織(zhī)的(dí)分布(bù)情況。

一(yī)
，特點：

使(shǐ)用時(shí)混(hùn)合(hé)3種溶(róng)液(yè)，可製備TRAP酶活性染色的顯色底(dǐ)物溶液(yè)。

ALP酶活性染色(sè)使用的是預混(hùn)物溶液，操作簡便。

TRAP的活(huó)性部位呈紅紫色，ALP的(dí)活性部(bù)位(wèi)呈(chéng)藍(lán)色（茶(chá)褐色），可雙重(zhòng)染色。適用於骨組織切片（脫(tuō)鈣GMA樹脂包(bāo)埋(mái)切(qiē)片）以(yǐ)及(jí)培養(yǎng)細胞(bāo)。

二(èr)
，染(rǎn)色方法

染色法(fǎ)是(shì)Lorch的Gomori法。使(shǐ)用的是(shì)偶(ǒu)氮染料(liào)法和(hé)耦(ǒu)合法結合(hé)的(dí)TRAP/ALP染色(sè)試(shì)劑盒。Lorch推薦切片厚(hòu)度(dù)為8μm，同時也研究了普(pǔ)通的(dí)4μm切(qiē)片(piàn)是(shì)否(fǒu)能(néng)染(rǎn)色(sè)
，雙重(zhòng)染(rǎn)色的順(shùn)序應(yīng)該先染TRAP和(hé)ALP中(zhōng)的(dí)哪(nǎ)一(yī)個(gè)
，封(fēng)片劑是否必(bì)須選(xuǎn)水溶(róng)性(xìng)封片劑等問題。

染(rǎn)色法結果：偶氮(dàn)染(rǎn)料(liào)法中切(qiē)片過(guò)厚(hòu)導致(zhì)酶(méi)擴散圖(tú)像。即用(yòng)TRAP染(rǎn)色骨質有紅(hóng)染傾向，但(dàn)即使是4μm厚(hòu)度，隻要增強(qiáng)反(fǎn)應條(tiáo)件（反應溫度(dù)和反應時間(jiān)），也能(néng)充分染(rǎn)色(sè)的(dí)。換言(yán)之(zhī)，TRAP染(rǎn)色(sè)中反應(yīng)溫度從室溫(wēn)調至37℃，反(fǎn)應時間(jiān)從30分(fēn)鐘調(tiáo)至(zhì)45分鐘(zhōng)或60分鐘。ALP染色在37℃反應45分鐘至(zhì)3小(xiǎo)時，或(huò)者(zhě)室(shì)溫(wēn)（10-15℃）下(xià)反(fǎn)應時(shí)間增加(jiā)至(zhì)一(yī)晚。此結(jié)果(guǒ)顯示，兩(liǎng)者色(sè)調(tiáo)平衡，染色效果好(hǎo)。但是，反(fǎn)應條(tiáo)件的增(zēng)強導致ALP染色切(qiē)片(piàn)產生了(liǎo)很多(duō)色素(sù)顆(kē)粒。另(lìng)外(wài)，TRAP和ALP的染色(sè)順序哪一(yī)個(gè)先染色都是可(kě)以(yǐ)的。如果先進行ALP染(rǎn)色(sè)時，在TRAP陽性部位呈明顯(xiǎn)的(dí)紅(hóng)色(sè)，鮮豔處為破(pò)骨(gǔ)細(xì)胞(bāo)。獲得(dé)比較(jiào)好(hǎo)的(dí)標(biāo)本。但是(shì)，ALP的反(fǎn)應產(chǎn)物經過TRAP溶(róng)液(yè)處理後(hòu)，會產(chǎn)生(shēng)白色混濁(zhuó)顆粒，沉澱在(zài)組織上。因此，先TRAP染(rǎn)色，接著(zhuó)ALP染(rǎn)色的方(fāng)法(fǎ)是可行的。封裝(zhuāng)法(fǎ)是(shì)利(lì)用甲基(jī)綠數秒(miǎo)間核染(rǎn)色(sè)處(chǔ)理。水(shuǐ)洗後，37℃下幹燥，二甲(jiǎ)苯浸透，用馬裏醇(Marinol)永(yǒng)jiu封存。

脫鈣(gài)石蠟(là)包埋切(qiē)片的TRAP/ALP雙(shuāng)重(zhòng)染(rǎn)色(sè)

用(yòng)1年齡(líng)小(xiǎo)鼠腰椎的(dí)EDTA脫鈣石蠟(là)切(qiē)片，進(jìn)行TRAP/ALP雙(shuāng)重染(rǎn)色(sè)。

TRAP陽(yáng)性(xìng)將破骨細(xì)胞染成紅(hóng)色，ALP陽(yáng)性將細(xì)胞(bāo)活(huó)性強的(dí)細(xì)胞（成骨(gǔ)細(xì)胞(bāo)軟(ruǎn)骨細胞）染(rǎn)成(chéng)褐(hè)色(sè)。（上：弱(ruò)擴大，下(xià)：強擴大(dà)）

TRAP和ALP的(dí)雙酶染色實(shí)驗(yàn)中(zhōng)通(tōng)過對固定(dìng)
，脫鈣(gài)
，染(rǎn)色進行(háng)多處(chǔ)改良，實(shí)現了對(duì)脫鈣石蠟標本(běn)的染(rǎn)色。但(dàn)是酶擴(kuò)散(sàn)圖像(xiàng)對(duì)TRAP染色的(dí)效果ji佳。出(chū)於(yú)各(gè)種原因(yīn)的考慮，關(guān)於(yú)固定步驟的(dí)影(yǐng)響(xiǎng)，如果(guǒ)固定(dìng)不充(chōng)分的(dí)話，容易(yì)抑製(zhì)脫(tuō)鈣水平。進(jìn)而導致酶(méi)擴散的發生。另外，注(zhù)意脫(tuō)鈣本身的(dí)影響(xiǎng)也是(shì)有必(bì)要(yào)的。總而言之，和(hé)非(fēi)脫鈣標本相(xiāng)比較(jiào)，脫鈣標本(běn)的擴散圖像更加明(míng)顯。脫鈣會使酶(méi)擴(kuò)散變(biàn)強。

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