產品名稱：索(suǒ)萊寶Solarbio小鼠(shǔ)脾髒淋巴細(xì)胞分離液(yè)試(shì)劑盒(hé)(P8860)現貨(huò)供應(yīng)

產(chǎn)品貨號：P8860

產(chǎn)品品牌：索萊寶

產(chǎn)品簡介(jiè)：

產品(pǐn)組成:

實驗(yàn)流程：

淋巴細胞分離(lí)方(fāng)法（僅(jǐn)供參(cān)考）

1. 製備脾(pí)髒的(dí)單細胞懸液。

2. 取一(yī)支(zhī)適(shì)當的離(lí)心(xīn)管，加入(rù)與(yǔ)脾(pí)髒(zàng)單細胞懸液(yè)等量的分(fēn)離液（分(fēn)離液最少不得少(shǎo)於3 mL，總(zǒng)體積不能超(chāo)過離心(xīn)管(guǎn)的三分之二，否(fǒu)則會影響(xiǎng)分(fēn)離(lí)效果）。

3. 小心吸取(qǔ)單細(xì)胞懸液加於分(fēn)離(lí)液液(yè)麵上，注(zhù)意(yì)保持兩(liǎng)液麵界麵(miàn)清晰。（可以(yǐ)使(shǐ)用(yòng)巴氏(shì)德吸管(guǎn)吸取(qǔ)單(dān)細胞懸液，然(rán)後(hòu)小心(xīn)的平鋪於分離液上(shàng)，因(yīn)為(wéi)兩者(zhě)的(dí)密(mì)度差異，將形成明顯(xiǎn)的(dí)分層界(jiè)麵(miàn)。）

4. 室溫(wēn)，水(shuǐ)平轉子(zǐ)500~900g，離(lí)心20~30min。（根(gēn)據脾(pí)髒單細(xì)胞懸液的量(liáng)確(què)定(dìng)離心(xīn)條(tiáo)件(jiàn)，單(dān)細胞懸液量越(yuè)大，離心力越(yuè)大，離(lí)心時間(jiān)越長，具(jù)體離心條件(jiàn)可以自(zì)行摸(mō)索，以達(dá)到最佳分離效果(guǒ)）。

5. 離心後，此時離心管中由上至下細胞分四層。第一層(céng)為(wéi)稀釋(shì)液層(céng)
；第(dì)二(èr)層為(wéi)環(huán)狀乳(rǔ)白(bái)色(sè)淋巴(bā)細胞(bāo)層
；第三層為透(tòu)明分離(lí)液層
；第(dì)四(sì)層(céng)為紅細胞層(céng)。

6. 用(yòng)吸管(guǎn)小(xiǎo)心(xīn)吸(xī)取第(dì)二層環狀(zhuàng)乳白(bái)色(sè)淋巴(bā)細胞(bāo)至(zhì)另(lìng)一潔(jié)淨的 15mL離心(xīn)管中，向(xiàng)離(lí)心(xīn)管(guǎn)中加入10ml細胞(bāo)洗(xǐ)滌(dí)液洗滌(dí)白(bái)膜(mó)層細(xì)胞(bāo)，250g，離心10min。

7. 棄上(shàng)清(qīng)，5mL的(dí)PBS或細胞清(qīng)洗液重懸(xuán)細(xì)胞(bāo)，250g，離心 10min。

8. 重復(fù)步驟7

9. 棄上清(qīng)，細胞重(zhòng)懸備用(yòng)。

脾髒(zàng)單(dān)細(xì)胞懸液(yè)的製(zhì)備方法(fǎ)（僅供(gōng)參考）

脾(pí)髒研磨(mó)的方法(fǎ)：

1. 無(wú)菌條件(jiàn)下摘(zhāi)取脾(pí)髒，撕去(qù)脾髒(zàng)被(bèi)膜(mó)，用(yòng)眼科(kē)剪(jiǎn)將脾(pí)髒剪成小塊。

2. 將(jiāng)尼(ní)龍篩(shāi)網(wǎng)或(huò)者是細(xì)胞過濾(lǜ)篩放置於(yú)平皿(mǐn)上(shàng)，加(jiā)入少(shǎo)量全(quán)血及組(zǔ)織稀釋液（保證脾髒及獲得的(dí)細胞(bāo)處於液體(tǐ)環(huán)境中(zhōng)）。

3. 將(jiāng)脾(pí)髒放置(zhì)於篩網上，使用(yòng)注射(shè)器活(huó)塞或者是無(wú)菌(jūn)鑷子(zǐ)來(lái)研磨脾髒（盡量(liáng)控(kòng)製(zhì)研磨(mó)力(lì)度，保(bǎo)持篩網懸(xuán)空，避免在皿底上(shàng)直(zhí)接(jiē)研(yán)磨而(ér)造成(chéng)大批細胞死(sǐ)亡）

4. 研(yán)磨後(hòu)使用全(quán)血及(jí)組(zǔ)織(zhī)稀釋液衝洗(xǐ)篩網，收集細(xì)胞懸(xuán)液(yè)，再經濾(lǜ)網(wǎng)過濾。

相關(guān)文獻(xiàn)：

[1] Yuying Liu,Xiaoyu Liang,Wenqian Dong,et al. Tumor-Repopulating Cells Induce PD-1 Expression in CD8+ T Cells by Transferring Kynurenine and AhR Activation. Cancer cell. March 2018. (IF 23.916)

[2] Qiushuang Zhang,Chao Xie,Dongyu Wang,et al. Improved Antitumor Efficacy of Combined Vaccine Based on the Induced HUVECs and DC-CT26 Against Colorectal Carcinoma. Cells. May 2019. (IF 5.656)

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