產(chǎn)品名稱(chēng)：索(suǒ)萊寶(bǎo)Solarbio小(xiǎo)鼠骨(gǔ)髓(suǐ)淋(lín)巴細(xì)胞分(fēn)離液試劑盒(P6040)現(xiàn)貨供應

產(chǎn)品(pǐn)貨(huò)號：P6040

產品品牌：索萊(lái)寶

產品簡介：

產(chǎn)品組(zǔ)成(chéng):

實驗流(liú)程：

淋(lín)巴(bā)細胞分離方法（僅供參(cān)考）

1. 製(zhì)備脾(pí)髒(zàng)的(dí)單(dān)細(xì)胞(bāo)懸液。

2. 取一支(zhī)適(shì)當(dāng)的離心(xīn)管(guǎn)，加(jiā)入(rù)與脾(pí)髒(zàng)單細(xì)胞(bāo)懸液等量的(dí)分離(lí)液（分離液(yè)最(zuì)少(shǎo)不得少於(yú)3 mL，總體積不能(néng)超(chāo)過(guò)離(lí)心(xīn)管(guǎn)的三(sān)分之二，否則會(huì)影(yǐng)響分離(lí)效(xiào)果(guǒ)）。

3. 小(xiǎo)心(xīn)吸取單(dān)細胞懸液加(jiā)於分離(lí)液液(yè)麵上(shàng)，注意(yì)保(bǎo)持(chí)兩(liǎng)液麵界(jiè)麵(miàn)清晰。（可以(yǐ)使用巴(bā)氏(shì)德吸管吸(xī)取(qǔ)單細(xì)胞懸(xuán)液(yè)，然(rán)後(hòu)小心的平(píng)鋪(pū)於(yú)分離液(yè)上(shàng)，因為(wéi)兩者的密度(dù)差(chà)異，將形成(chéng)明顯的(dí)分層(céng)界麵(miàn)。）

4. 室溫(wēn)，水(shuǐ)平(píng)轉子(zǐ)500~900g，離心20~30min。（根(gēn)據脾髒(zàng)單(dān)細(xì)胞懸(xuán)液(yè)的(dí)量確定離心(xīn)條(tiáo)件，單細胞懸(xuán)液量(liáng)越大(dà)，離(lí)心力越(yuè)大(dà)，離心(xīn)時間(jiān)越(yuè)長(cháng)，具體離心條(tiáo)件可以自行(háng)摸索，以(yǐ)達到最佳(jiā)分離效果）。

5. 離心後(hòu)，此時(shí)離心管中由(yóu)上至下細胞分四(sì)層(céng)。第一層為稀釋液(yè)層；第(dì)二層為(wéi)環狀乳(rǔ)白(bái)色(sè)淋巴(bā)細胞(bāo)層(céng)；第三(sān)層(céng)為(wéi)透(tòu)明分(fēn)離液層；第(dì)四(sì)層(céng)為紅細(xì)胞層。

6. 用(yòng)吸(xī)管小(xiǎo)心吸取(qǔ)第(dì)二層環狀乳白色(sè)淋巴細胞至另一(yī)潔(jié)淨的 15mL離心(xīn)管中，向離(lí)心管(guǎn)中加(jiā)入(rù)10ml細胞洗滌(dí)液(yè)洗滌(dí)白(bái)膜(mó)層(céng)細胞，250g，離(lí)心10min。

7. 棄(qì)上(shàng)清，5mL的(dí)PBS或細胞(bāo)清(qīng)洗液重懸細胞，250g，離(lí)心 10min。

8. 重(zhòng)復步(bù)驟(zhòu)7

9. 棄上(shàng)清，細胞重(zhòng)懸(xuán)備用。

骨(gǔ)髓單細胞懸(xuán)液(yè)的(dí)製備方(fāng)法(fǎ)（僅供參考(kǎo)）

小動物骨髓(suǐ)的(dí)采(cǎi)集(jí)：

1. 處(chǔ)死(sǐ)動(dòng)物，無(wú)菌提取股骨和脛(jìng)骨，剪(jiǎn)去(qù)兩端軟(ruǎn)骨(gǔ)，露出(chū)紅(hóng)色的骨髓(suǐ)腔(qiāng)（注意盡可能少(shǎo)的剪(jiǎn)走(zǒu)骨髓腔(qiāng)）。

2. 取1ml的(dí)無(wú)菌(jūn)注(zhù)射器，吸取少量(liáng)的含(hán)有(yǒu)10%標準胎牛(niú)血(xiě)清(qīng)的稀釋(shì)液(yè)或者(zhě)是(shì)含(hán)有(yǒu)血清(qīng)的培(péi)養(yǎng)基，衝(chōng)洗(xǐ)骨(gǔ)髓腔以(yǐ)獲得(dé)骨髓(suǐ)。

3. 最終製(zhì)備(bèi)成2×108–1×109 /ml 的單細胞(bāo)懸(xuán)液(yè)備(bèi)用。大(dà)動(dòng)物骨(gǔ)髓(suǐ)的采集：大(dà)動物(wù)骨(gǔ)髓(suǐ)的(dí)采(cǎi)集(jí)可(kě)采取活(huó)體(tǐ)穿刺方法(fǎ)：先(xiān)將(jiāng)動物麻醉(zuì)
，固(gù)定
，局部(bù)除毛
，消(xiāo)毒皮(pí)膚，然後(hòu)估計(jì)好(hǎo)皮膚(fū)到骨髓的(dí)距離，把骨髓穿(chuān)刺針的長度(dù)固定好。操(cāo)作人(rén)員用左(zuǒ)手(shǒu)把(bǎ)穿刺(cì)點周(zhōu)圍的皮膚繃緊(jǐn)，右(yòu)手(shǒu)將穿(chuān)刺針鑽入，當(dāng)穿刺(cì)針進入骨(gǔ)髓腔時(shí)常(cháng)有(yǒu)落空(kōng)感。連接注射(shè)器緩慢抽吸骨(gǔ)髓組織，當注(zhù)射(shè)器內抽(chōu)到(dào)少許(xǔ)骨(gǔ)髓時即停止抽(chōu)吸。用(yòng)含10%標準(zhǔn)胎牛血(xiě)清的稀釋液調(tiáo)整(zhěng)細(xì)胞濃度為2×10⁸-1×10⁹ /mL的(dí)單細胞懸液(yè)備用。

相(xiāng)關文獻：

[1] Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7.

[2] Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.

[3] Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974; 4(4): 269-74.

[4] Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox Sang. 1972; 23(5): 478-80.

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