ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，酶聯(lián)免(miǎn)疫(yì)吸(xī)附(fù)試(shì)驗)是(shì)一種(zhǒng)常(cháng)用(yòng)的(dí)實(shí)驗技(jì)術(shù)，用於檢測(cè)和定量(liáng)分析樣品中特定(dìng)抗(kàng)原或抗體的存(cún)在(zài)。ELISA是(shì)基於免疫(yì)學原理的(dí)一種高靈敏(mǐn)度和(hé)高特異(yì)性的實驗方(fāng)法(fǎ)。下(xià)麵讓我們一起來看(kàn)看ELISA實(shí)驗操作方(fāng)法吧
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　　ELISA實(shí)驗通(tōng)常包(bāo)括(kuò)以(yǐ)下(xià)步驟：
 

　　1. 塗(tú)覆：將待檢(jiǎn)測(cè)的抗(kàng)原(yuán)或(huò)抗體溶(róng)液加(jiā)入到(dào)微(wēi)孔板(通(tōng)常是96孔板)中(zhōng)，並(bìng)在(zài)孔板表(biǎo)麵上形(xíng)成(chéng)一層固定(dìng)的抗(kàng)原或抗體(tǐ)。這(zhè)個過程(chéng)被稱(chēng)為塗覆。
 

　　2. 阻斷(duàn)：為了(liǎo)防止(zhǐ)非特(tè)異(yì)性(xìng)結合，需要在(zài)塗(tú)覆後加入一(yī)種阻斷劑(jì)，例如(rú)牛(niú)血(xiě)清蛋白(bái)(BSA)或牛奶(nǎi)粉，以(yǐ)覆蓋孔(kǒng)板(bǎn)上未(wèi)被固(gù)定的表麵。阻斷劑可(kě)以(yǐ)減少(shǎo)非特異性(xìng)結合和降(jiàng)低(dī)背(bèi)景(jǐng)信號(hào)。
 

　　3. 樣品加入：將待測(cè)樣品加入到(dào)微孔板(bǎn)中(zhōng)，樣品中的目標抗原或(huò)抗體與固定在(zài)孔(kǒng)板上的抗(kàng)體(tǐ)或抗原相(xiāng)互(hù)作用(yòng)。
 

　　4. 洗滌：通過反(fǎn)復洗滌孔板，去(qù)除(chú)未(wèi)結(jié)合的物質(zhì)，以減少背景(jǐng)信(xìn)號。
 

　　5. 探(tàn)針加(jiā)入：加(jiā)入與待測物(wù)體特異(yì)性結合(hé)的酶標記二抗(例如辣(là)根過氧(yǎng)化物酶-HRP)或(huò)酶標記(jì)抗原(yuán)，使其(qí)與(yǔ)樣品中的目標物體結(jié)合。
 

　　6. 洗滌：再次(cì)洗(xǐ)滌(dí)孔板，去(qù)除未結合(hé)的(dí)酶標(biāo)記物。
 

　　7. 底物(wù)加入(rù)：加(jiā)入(rù)一種(zhǒng)底物(wù)，其(qí)與(yǔ)酶標記物相(xiāng)互作(zuò)用(yòng)，產生可測量的信號(hào)。常用(yòng)的底物是(shì)一(yī)種可(kě)被酶(méi)催(cuī)化(huà)產生顏(yán)色(sè)或熒(yíng)光的物質(zhì)。
 

　　8. 反(fǎn)應(yīng)停止(zhǐ)：通(tōng)過(guò)加入一種停(tíng)止劑(jì)，停(tíng)止(zhǐ)底(dǐ)物(wù)的(dí)反應，阻止(zhǐ)信號(hào)進一步(bù)增加。
 

　　9. 信(xìn)號(hào)測量：使用(yòng)光譜儀(yí)或熒(yíng)光(guāng)測量儀測量底物反(fǎn)應(yīng)產(chǎn)生的信(xìn)號(hào)，根據(jù)信(xìn)號的強度來確(què)定(dìng)樣(yàng)品(pǐn)中目標(biāo)物體的(dí)濃(nóng)度(dù)。
 

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