ELISA是分子生(shēng)物(wù)學(xué)，免疫學和細(xì)胞生(shēng)物(wù)學(xué)研究中常用到(dào)的實(shí)驗(yàn)操作(zuò)之一，相信大家常常會有(yǒu)這樣(yàng)那(nà)樣的實(shí)驗(yàn)問題。下麵讓(ràng)我(wǒ)們(mén)一起來(lái)看看ELISA實驗的(dí)常(cháng)見(jiàn)問(wèn)題(tí)都(dū)有哪些(xiē)吧！
 

　　1. 洗板不幹(gān)淨(jìng)
 

　　解決方法：
 

　　①充分(fēn)洗滌：如果(guǒ)洗板的(dí)時(shí)間不夠，會導致(zhì)抗體(tǐ)殘留，陰性(xìng)對(duì)照(zhào)會顯色(sè)，嘗試延(yán)長洗板時間，增加洗板頻率，在洗(xǐ)液中添(tiān)加(jiā)表麵活(huó)性劑(jì)Tween-20。
 

　　在洗板(bǎn)時要保證每步都洗滌(dí)幹淨(jìng)，充分(fēn)拍(pāi)板直(zhí)至孔內(nèi)沒有(yǒu)明(míng)顯的殘(cán)留液(yè)體(tǐ)。
 

　　②避(bì)免交叉汙染(rǎn)：棄去洗(xǐ)液和(hé)孵育(yù)的(dí)抗體(tǐ)時避(bì)免(miǎn)交叉汙染(rǎn)，移液(yè)槍頭盡可(kě)能一(yī)次性使用，拍板的濾(lǜ)紙不要反復使用。
 

　　2. 顯色液(yè)變質或者試劑(jì)過期
 

　　解(jiě)決方(fāng)法：檢查試(shì)劑(jì)盒有效期，或(huò)使用(yòng)新的試劑盒並按照說(shuō)明書要求(qiú)保存試(shì)劑盒(hé)。每(měi)次用剩(shèng)下(xià)的顯色液最好不(bù)要回(huí)收(shōu)，或者(zhě)隻(zhī)回(huí)收洗(xǐ)淨的容器裝的顯(xiǎn)色液。
 

　　3. 試(shì)劑稀(xī)釋(shì)有誤，檢測(cè)抗體/酶(méi)結合物(wù)工作液濃度過高(gāo)
 

　　解(jiě)決方(fāng)法：按照(zhào)說明書推薦(jiàn)的(dí)稀(xī)釋(shì)倍數稀釋抗(kàng)體。
 

　　4. 試劑(jì)盒組分未平衡
 

　　解決(jué)方法：試(shì)劑(jì)盒(hé)每(měi)個(gè)組(zǔ)分都(dū)需要(yào)平衡(héng)至(zhì)室溫後(hòu)進(jìn)行實(shí)驗。
 

　　5. 混用其(qí)他試劑(jì)盒(hé)試劑
 

　　解(jiě)決方法(fǎ)：保證(zhèng)使(shǐ)用試劑盒內(nèi)完(wán)整的一套試劑進(jìn)行(háng)實驗，不同品(pǐn)牌及(jí)不同批次間(jiān)的(dí)試劑可能存在不(bù)匹配現(xiàn)象，不同(tóng)批(pī)號的試劑(jì)不要混(hùn)用(yòng)。
 

　　6. 蒸餾水受酶(méi)等汙染
 

　　解(jiě)決方(fāng)法：使(shǐ)用新(xīn)鮮蒸餾水(shuǐ)。
 

　　7. 培養(yǎng)箱(xiāng)溫度(dù)超過(guò)37℃或(huò)反應時間過長
 

　　解決方法(fǎ)：孵育(yù)時間過(guò)長，溫(wēn)度過高(gāo)可(kě)能會導(dǎo)致(zhì)非特(tè)異(yì)性(xìng)結合增加，從而(ér)造成(chéng)本底(dǐ)增(zēng)高。檢查恒溫(wēn)箱，確(què)保(bǎo)孵育溫(wēn)度穩定(dìng)在(zài)37℃，按照說明書的反應時間(jiān)進行(háng)孵(fū)育(yù)。
 

　　8. 酶標板(bǎn)底(dǐ)部有汙(wū)漬
 

　　解(jiě)決(jué)方(fāng)法：在(zài)加完終止液之後(hòu)，檢測之前(qián)，用75%乙(yǐ)醇浸潤的(dí)脫脂(zhī)棉球擦拭酶標板底(dǐ)部，確認(rèn)沒有汙漬之後(hòu)再檢(jiǎn)測。
 

　　9. 洗液被汙染(rǎn)
 

　　解決方法(fǎ)：洗(xǐ)液(yè)現配現用，長(cháng)期放(fàng)置會析出，也(yě)可(kě)能(néng)會汙染，導(dǎo)致背景(jǐng)偏(piān)高。
 

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