一，前(qián)言(yán)

在質(zhì)粒(lì)提取中，其原理(lǐ)是基於生(shēng)物(wù)大(dà)分(fēn)子在物(wù)理和化學(xué)性質上(shàng)的差異(yì)，通(tōng)過變性(xìng)，復(fù)性(xìng)，沉澱和純化等實驗步驟進行(háng)區(qū)分，提取。蛋白(bái)質在鹼性環(huán)境下(xià)容(róng)易發生(shēng)變(biàn)性，使(shǐ)用(yòng) SDS (十二烷(wán)基*)等去(qù)垢劑破(pò)壞細胞膜時(shí)，SDS 與蛋白質(zhì)發生變(biàn)性(xìng)，形成復(fù)合物(wù)，使其沉(chén)澱；RNA 通常會(huì)加入(rù) RNase 降(jiàng)解 RNA，但一(yī)般(bān) RNase 的(dí)加入時(shí)間通常在(zài)細(xì)菌/細胞裂(liè)解(jiě)之後，質(zhì)粒(lì) DNA 純化(huà)之前(qián)，以確(què)保 RNA 被充(chōng)分降解；最(zuì)關(guān)鍵的(dí)問(wèn)題(tí)是: 如何將染(rǎn)色體(tǐ) DNA 和質(zhì)粒 DNA 區分(fēn)出來？

二(èr)，如何(hé)區分染(rǎn)色(sè)體DNA和質粒DNA

細菌沒有細胞核(hé)，隻有(yǒu)一個(gè)擬(nǐ)核(nucleoid)，而染色(sè)體 DNA 是(shì)環(huán)狀的，但(dàn)並(bìng)非裸(luǒ)露的(dí)，上麵(miàn)結合有多種(zhǒng) NAPs(nucleoid-associated proteins)。NAPs 和(hé)基因轉錄活性可以改(gǎi)變(biàn)擬(nǐ)核的形(xíng)態結構(gòu)。這樣的(dí)話(huà)，質粒 DNA 就(jiù)要簡單(dān)很多(duō)，遊(yóu)離於(yú)細胞質(zhì)中(zhōng)，以(yǐ)共價(jià)閉環 cccDNA(convalently closed circular DNA)的(dí)形(xíng)態存在。

在(zài)強鹼和(hé) SDS 的條件下，染色體(tǐ) DNA會(huì)被降(jiàng)解成綫性片段並發生變性(xìng)。當加(jiā)入(rù)中和(hé)液(yè)(如(rú)醋(cù)酸鈉(nà))後，染色體 DNA 雖(suī)然會復性，但(dàn)無法(fǎ)恢復其(qí)原始(shǐ)的(dí)雙鏈結構，而是(shì)形成(chéng)一團(tuán)纏繞(rào)在(zài)一起無法溶解的網狀結構(gòu)，通過(guò)高速離心(xīn)，這(zhè)些(xiē)變(biàn)性的染色(sè)體 DNA 會與(yǔ) SDS-protein 復合(hé)物一起沉澱到管(guǎn)底，從而(ér)與質粒(lì) DNA 分離(lí)；然(rán)後在強鹼環(huán)境下，質粒 DNA雖然(rán)也(yě)發(fā)生(shēng)一定(dìng)程度的(dí)變性，但(dàn)其兩條互(hù)補鏈仍會(huì)緊密盤(pán)繞(rào)在一起(qǐ)，保(bǎo)持雙(shuāng)鏈結(jié)構(gòu)，加入(rù)中和液(yè)後，質粒(lì) DNA 能(néng)夠迅(xùn)速復(fù)性，恢復(fù)其天然的雙鏈結構，並以溶(róng)液(yè)狀態存在於上(shàng)清(qīng)液中，通(tōng)過(guò)後續純化步驟(zhòu)(過柱或磁珠吸附(fù))，可(kě)以(yǐ)進(jìn)一步獲得高(gāo)純度的質(zhì)粒 DNA。

三，有關質(zhì)粒(lì)的產(chǎn)品推(tuī)薦(jiàn)