一(yī)，準(zhǔn)備(bèi)工作：6孔(kǒng)板,marker筆,直尺,無(wú)血(xiě)清培(péi)養基(jī),完(wán)quan培養基(jī),PBS,離(lí)心管(guǎn),胰酶。

二(èr)，實驗步驟(zhòu)：培養板劃(huá)綫一(yī)計數一鋪板一細胞(bāo)劃(huá)綫一(yī)清(qīng)洗一(yī)培(péi)養並觀(guān)察(chá)一(yī)結果(guǒ)分析
1.使用marker筆(bǐ)在(zài)6孔板背後(hòu)，用(yòng)直尺(chǐ)均(jūn)匀地(dì)劃(huá)橫(héng)綫，每隔(gé)0.5~1cm劃一道，橫(héng)穿過(guò)孔，每孔(kǒng)至(zhì)少穿(chuān)過5條(tiáo)綫(xiàn)。
2.通過胰酶(méi)消(xiāo)化細胞製(zhì)備細胞懸液。細胞計(jì)數後(hòu)鋪板(bǎn)，確(què)保(bǎo)每組(zǔ)細(xì)胞鋪板密度(dù)一(yī)致(zhì)，一(yī)般在孔內接種約5-10×105個細胞（可根據(jù)細(xì)胞(bāo)的生長(cháng)速(sù)度(dù)調整接(jiē)種數(shù)量(liáng)）。

3第(dì)二(èr)天，使用(yòng)移液槍槍頭(tóu)（20ul），與(yǔ)細(xì)胞平(píng)麵垂(chuí)直，在細(xì)胞層上(shàng)沿(yán)著marker筆印記(jì)進行劃痕(hén)（畫(huà)十字(zì)）。

4.劃(huá)痕完(wán)成(chéng)後，吸取(qǔ)舊(jiù)培(péi)養基，然(rán)後(hòu)使用無(wú)菌PBS洗(xǐ)滌(dí)細胞3次，洗去(qù)劃痕(hén)下的細(xì)胞，使留(liú)下的間隙肉(ròu)眼可見清晰(xī)。接(jiē)著加(jiā)入(rù)新(xīn)鮮(xiān)無血(xiě)清(qīng)或低(dī)血(xiě)清（<2%）的培養(yǎng)基(jī)，使用顯(xiǎn)微鏡(jìng)拍照，作為對(duì)照(zhào)組。

根(gēn)據(jù)需要設(shè)立實驗組和對(duì)照組。對於(yú)不(bù)需要(yào)藥(yào)物(wù)的空白(bái)對照(zhào)組(zǔ)，隻(zhī)需添加(jiā)等量(liáng)的無血清(qīng)培(péi)養基即可；而(ér)藥(yào)物幹預(yù)組則需加入含藥物的無血(xiě)清培(péi)養基(jī)。

5.首先(xiān)需將細胞置(zhì)於(yú)37℃，5%CO2的培養箱中進行(háng)培養。接著，在(zài)不同(tóng)時間點（如(rú)0，6，12，24小(xiǎo)時），取出(chū)細(xì)胞進行(háng)顯微鏡觀(guān)察(chá)，並拍照記錄(lù)。

6.劃痕(hén)實(shí)驗的數據分(fēn)析(xī)，通常(cháng)有兩(liǎng)種主(zhǔ)要方法：
第(dì)一種(zhǒng)是根據細(xì)胞(bāo)的遷(qiān)移距(jù)離進行(háng)統計。這一方法通過(guò)比(bǐ)較初始劃痕綫(xiàn)與(yǔ)後續觀察點的(dí)劃(huá)痕距(jù)離來(lái)評(píng)估細(xì)胞(bāo)的(dí)遷(qiān)移(yí)能力。
第二種(zhǒng)方法是通(tōng)過劃痕(hén)麵積來進行分(fēn)析(xī)。這(zhè)種(zhǒng)方法(fǎ)則(zé)通(tōng)過(guò)對比(bǐ)初始劃(huá)痕綫與(yǔ)後(hòu)續(xù)觀(guān)察(chá)點的(dí)劃痕麵積來評估細(xì)胞遷移(yí)的情況(kuàng)。在(zài)進行(háng)數據(jù)統(tǒng)計分析時(shí)，這兩種指標都(dū)可(kě)以被有效(xiào)地使用來(lái)評估細(xì)胞(bāo)的遷(qiān)移能力。

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