一，準備(bèi)工(gōng)作(zuò) 

  準備(bèi)工作對開展(zhǎn)細(xì)胞培養異常重要(yào)，工作量(liáng)也較大，應給(gěi)予足(zú)夠的(dí)重(zhòng)視(shì)，推(tuī)備工作(zuò)中某(mǒu)一環(huán)節(jié)的(dí)疏忽可(kě)導致(zhì)實驗(yàn)失敗(bài)或(huò)無法進行(háng)。準備工(gōng)作的內容包(bāo)括(kuò)器(qì)皿(mǐn)的(dí)清洗(xǐ)，幹(gān)燥(zào)與消毒，培(péi)養(yǎng)基與(yǔ)其(qí)他試劑(jì)的配製(zhì)，分(fēn)裝及滅菌，無(wú)菌室(shì)或(huò)超淨台(tái)的清(qīng)潔與(yǔ)消(xiāo)毒，培養箱及(jí)其他儀器(qì)的(dí)檢查與調試。

二，取材

 在無菌環(huán)境(jìng)下從機(jī)體取出(chū)某(mǒu)種(zhǒng)組織(zhī)細胞（視(shì)實驗(yàn)目(mù)的(dí)而(ér)定(dìng)），經過一定的處(chǔ)理(lǐ)（如消化分散細胞，分離等(děng)）後(hòu)接入培(péi)養(yǎng)器血(xiě)中，這一過程(chéng)稱為(wéi)取材。如(rú)是(shì)細(xì)胞(bāo)株的擴(kuò)大(dà)培養則無取材這一過(guò)程(chéng)。機體(tǐ)取(qǔ)出的(dí)組織細(xì)胞的shou次培(péi)養稱為原代(dài)培養。

理論上講(jiǎng)各種動物(wù)和人(rén)體(tǐ)內(nèi)的(dí)所(suǒ)有(yǒu)組(zǔ)織都可以用於培養(yǎng)，實際上幼體(tǐ)組織(zhī)（尤其是胚胎(tāi)組織）比成年個(gè)體(tǐ)的組織(zhī)容(róng)易(yì)培養(yǎng)，分化程度低的組(zǔ)織比分化高(gāo)的(dí)容易培養，腫瘤(liú)組織比正常(cháng)組(zǔ)織容(róng)易培養(yǎng)。取材後應立(lì)即處(chǔ)理(lǐ)，盡(jìn)快培養，因故不(bù)能馬上培(péi)養時(shí)，可(kě)將組織(zhī)塊切成黃豆(dòu)般大的小塊(kuài)，置4℃的培(péi)養液中保存(cún)。取組(zǔ)織時(shí)應(yīng)嚴格(gé)保(bǎo)持(chí)無(wú)菌(jūn)，同時也(yě)要避免(miǎn)接觸(chù)其他(tā)的(dí)有害物質。取(qǔ)病理(lǐ)組(zǔ)織和(hé)皮膚及消(xiāo)化道上(shàng)皮(pí)細胞(bāo)時容易(yì)帶(dài)菌，為減少汙(wū)染可用(yòng)抗(kàng)菌素處理(lǐ)。

三，培養(yǎng) 

  將(jiāng)取得的組織(zhī)細(xì)胞(bāo)接入培養(yǎng)瓶或(huò)培養(yǎng)板(bǎn)中的過程稱為培(péi)養。如係組織(zhī)塊(kuài)培(péi)養(yǎng)，則直(zhí)接(jiē)將(jiāng)組織塊(kuài)接入(rù)培(péi)養(yǎng)器皿底部，幾(jī)個(gè)小時後組織塊可貼牢(láo)在(zài)底部，再加入培(péi)養基。如(rú)係(xì)細(xì)胞(bāo)培養(yǎng)，一(yī)般(bān)應(yīng)在接(jiē)入(rù)培養(yǎng)器皿之(zhī)前進(jìn)行細胞(bāo)計(jì)數(shù)，按要求以(yǐ)一(yī)定的量（以(yǐ)每毫(háo)升細(xì)胞數表示）接入(rù)培養器皿(mǐn)並(bìng)直接加(jiā)入培(péi)養(yǎng)基(jī)。細胞進(jìn)入(rù)培養器(qì)皿後(hòu)，立即放入(rù)培養箱中，使細(xì)胞盡早(zǎo)進入生長狀態。

正(zhèng)在(zài)培養中的細胞應每隔一定(dìng)時(shí)間(jiān)觀(guān)察一次(cì)，觀(guān)察(chá)的(dí)內容(róng)包括細胞(bāo)是否(fǒu)生長(cháng)良好(hǎo)，形態是否(fǒu)正常(cháng)，有(yǒu)無汙染(rǎn)，培養基(jī)的(dí)PH是(shì)否太(tài)酸或太鹼(jiǎn)（由(yóu)酚(fēn)紅指(zhǐ)示(shì)劑(jì)指(zhǐ)示），此外(wài)對(duì)培養溫度和(hé)CO₂濃(nóng)度也要定(dìng)時檢(jiǎn)查(chá)。

  原(yuán)代(dài)培(péi)養(yǎng)一般(bān)有(yǒu)一(yī)段潛伏(fú)期（數小時到(dào)數(shù)十天(tiān)不等），在(zài)潛伏(fú)期細(xì)胞一般(bān)不分裂(liè)，但(dàn)可貼壁(bì)和遊走。過了(liǎo)潛(qián)伏期後細胞進(jìn)入(rù)旺盛的分裂(liè)生長期(qī)。細(xì)胞長滿瓶底後要進行傳(chuán)代培養，將(jiāng)一(yī)瓶中的(dí)細胞(bāo)消化懸(xuán)浮後分至(zhì)兩(liǎng)到(dào)三瓶繼(jì)續培(péi)養。每傳代(dài)一(yī)次(cì)稱為“一(yī)代”。二倍體(tǐ)細胞(bāo)一(yī)般(bān)隻(zhī)能(néng)傳幾十代，而(ér)轉(zhuǎn)化細胞係(xì)或(huò)細胞株(zhū)則(zé)可無限地傳(chuán)代下去。轉(zhuǎn)化(huà)細胞可(kě)能(néng)具(jù)有惡(è)性(xìng)性質(zhì)，也(yě)可(kě)能僅(jǐn)有不(bù)死(sǐ)性(xìng)（Immortality）而無(wú)惡性(xìng)。

四(sì)，凍存及復蘇

  （詳(xiáng)細(xì)關於(yú)，以前有發(fā)過(guò)，可(kě)點擊跳轉(zhuǎn)）為(wéi)了保存細(xì)胞，特(tè)別是不易(yì)獲得的突變型細(xì)胞(bāo)或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮(dàn)的(dí)溫度－196℃，將(jiāng)細(xì)胞(bāo)收(shōu)集至(zhì)凍(dòng)存(cún)管中加(jiā)入含(hán)保護劑（一般為二甲亞碸或甘(gān)油(yóu)）的培養基(jī)，以一定的冷(lěng)卻速(sù)度(dù)凍(dòng)存(cún)，最(zuì)終保存(cún)於(yú)液(yè)氮中(zhōng)。在極低(dī)的溫度下(xià)，細胞保(bǎo)存(cún)的(dí)時間幾(jī)乎是(shì)無(wú)限的(dí)。復(fù)蘇(sū)一般采(cǎi)用快(kuài)融方法，即(jí)從液氮(dàn)中取出(chū)凍存管後(hòu)，立即(jí)放(fàng)入37℃水中，使之在一分(fēn)鐘(zhōng)內(nèi)迅速融解。然後(hòu)將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿(mǐn)中進(jìn)行培養(yǎng)。

凍存過程(chéng)中(zhōng)保護(hù)劑(jì)的選(xuǎn)用(yòng)，細(xì)胞密(mì)度，降溫(wēn)速(sù)度(dù)及(jí)復蘇時(shí)溫度，融化(huà)速度等都(dū)對細胞(bāo)活力有(yǒu)影響。

五(wǔ)，常用儀(yí)器設備(bèi) 

  無菌(jūn)室,超淨(jìng)工作台,三重純(chún)水蒸餾器(qì),抽氣泵(bèng),壓力蒸氣(qì)消(xiāo)毒器(qì),電(diàn)熱恒溫(wēn)培養(yǎng)箱(xiāng)，培(péi)養器具，CO₂培養(yǎng)箱,恒(héng)溫水浴鍋，倒(dǎo)置(zhì)顯微(wēi)鏡(jìng),離心機,無菌過濾器，洗(xǐ)刷裝置,細胞(bāo)計(jì)數板和電(diàn)子(zǐ)細胞(bāo)技(jì)術儀(yí)等等(děng)。

六，常(cháng)用(yòng)細胞培養基

(1)MEM細胞(bāo)培(péi)養(yǎng)基係(xì)列(liè)

(2)係(xì)列

(3)係(xì)列

(4)199細(xì)胞培(péi)養基係(xì)列(liè)

(5)水解乳(rǔ)蛋(dàn)白細胞培養(yǎng)基(jī)

(6)歐氏平衡(héng)鹽(yán)

(7)F-10,F-12細胞(bāo)培(péi)養基係列(liè)

(8)其(qí)它類型細胞培養(yǎng)基(jī)