一，細胞遷移

     細胞(bāo)遷移 (cell migration) 也稱為細(xì)胞(bāo)爬行(háng)，細(xì)胞(bāo)移動或(huò)細(xì)胞運動，是指(zhǐ)細胞(bāo)在(zài)接(jiē)收到遷移信號或(huò)感受(shòu)到某些物(wù)質的(dí)梯度(dù)後而(ér)產生(shēng)的(dí)移動(dòng)。細胞(bāo)遷移(yí)為細胞頭(tóu)部偽(wěi)足(zú)的(dí)延伸，新的黏(nián)附建(jiàn)立(lì)，細胞(bāo)體(tǐ)尾部(bù)收(shōu)縮在時(shí)空上的(dí)交(jiāo)替過程。細胞遷移是正(zhèng)常(cháng)細胞的基本功(gōng)能之一，是(shì)機(jī)體(tǐ)正常(cháng)生(shēng)長發育的生理過(guò)程(chéng)，也是活細(xì)胞普(pǔ)遍存(cún)在的一種運(yùn)動(dòng)形式(shì)。胚(pēi)胎發(fā)育(yù)，血(xiě)管生成(chéng)，傷(shāng)口(kǒu)愈合，免疫反(fǎn)應，炎症反(fǎn)應(yīng)，動(dòng)脈(mài)粥樣硬化，癌症(zhèng)轉移等過(guò)程(chéng)中都(dū)涉及細(xì)胞遷移。細胞(bāo)遷移實(shí)驗(yàn)是(shì)研(yán)究細胞(bāo)在(zài)體(tǐ)外條件下移(yí)動(dòng)能力(lì)的(dí)一種實驗(yàn)方法(fǎ)，廣(guǎng)泛應(yīng)用於細(xì)胞生(shēng)物(wù)學(xué)，腫瘤學和免疫(yì)學等(děng)領(lǐng)域。細胞(bāo)遷移(yí)實(shí)驗(yàn)基於(yú)細(xì)胞(bāo)對(duì)環境變(biàn)化的(dí)反應(yīng)能力，這些變(biàn)化可以(yǐ)是物理的（如空間間隙）或(huò)化學(xué)的（如梯度差(chà)）。實驗目(mù)的是(shì)模擬(nǐ)並觀(guān)察細胞(bāo)如何在這些條件變(biàn)化(huà)下(xià)移動，從(cóng)而了(liǎo)解(jiě)細胞遷移(yí)的機製和影(yǐng)響(xiǎng)因(yīn)素(sù)。

二，Transwell細胞遷移實驗

1，簡(jiǎn)介

Transwell實驗(yàn)，也(yě)稱為Transwell遷移(yí)或侵襲測定實驗(yàn)，是(shì)一種用(yòng)於(yú)細(xì)胞生物學和分(fēn)子生物學的實驗室(shì)技術，用(yòng)於研究細胞通(tōng)過多孔膜的運動(dòng)。它通常(cháng)用於(yú)研(yán)究細胞(bāo)對(duì)各(gè)種(zhǒng)刺激（如(rú)生長(cháng)因子，趨(qū)化因子或細(xì)胞(bāo)外基質成(chéng)分(fēn)）的遷(qiān)移(yí)，趨(qū)化性(xìng)和(hé)侵襲。Transwell實(shí)驗對於評(píng)估(gū)細胞通過(guò)多孔屏(píng)障(zhàng)遷移(yí)或侵襲(xí)的(dí)能(néng)力特別有用，多(duō)孔屏(píng)障模(mó)擬細胞(bāo)必須穿(chuān)過(guò)體(tǐ)內組(zǔ)織的生理(lǐ)條(tiáo)件。Transwell實驗涉及(jí)Transwell小(xiǎo)室(shì)（插入(rù)物(wù)）和孔板(bǎn)，它們是(shì)一種(zhǒng)由(yóu)分(fēn)隔兩個(gè)隔室(shì)的滲透(tòu)膜(mó)組(zǔ)成的裝置。 通常(cháng)，頂(dǐng)部(bù)室充(chōng)滿細(xì)胞，而底部室包含化學(xué)引(yǐn)誘劑(jì)或誘導細(xì)胞遷移的物質。多(duō)孔膜允(yǔn)許細胞通過膜上的小(xiǎo)孔從(cóng)頂部室遷移(yí)到底部室(shì)。

2，步驟

1）在(zài)24孔(kǒng)板中(zhōng)放(fàng)置Transwell插入(rù)物。向每個(gè)Transwell上(shàng)室添加適(shì)量(liáng)無(wú)血(xiě)清培(péi)養(yǎng)基（通(tōng)常為(wéi)100-200 µL），向下室(shì)添(tiān)加(jiā)含有化(huà)學(xué)誘導劑的(dí)培養(yǎng)基（通常(cháng)為(wéi)600-800 µL）。

2）用無菌(jūn)PBS清洗培養的(dí)細胞。使用胰酶(méi)消(xiāo)化(huà)細胞，並加入(rù)含(hán)有無(wú)血(xiě)清(qīng)培(péi)養(yǎng)基的管中中止消化。計(jì)數細(xì)胞，並調整細胞懸(xuán)液至適(shì)當濃度（例如(rú)1×105 cells/mL）。

3）向Transwell上室中(zhōng)添加(jiā)適(shì)量(liáng)的細胞懸(xuán)液（通常為100-200 µL）。小心處理以避免(miǎn)氣泡形(xíng)成(chéng)。

4）將Transwell板放入(rù)37°C，5% CO2培(péi)養(yǎng)箱中(zhōng)孵(fū)育(yù)24-48小時(shí)，以允許(xǔ)細胞遷(qiān)移。

5）孵育結束後，取出Transwell插(chā)入物(wù)。

6）用無(wú)菌(jūn)PBS輕(qīng)輕(qīng)清洗上室(shì)，去除未遷移(yí)的(dí)細胞。

7）用固定(dìng)液(yè)（如(rú)甲(jiǎ)醇(chún)或(huò)4%多聚(jù)甲醛）固定下室(shì)遷移的細胞，固定(dìng)時間通(tōng)常為(wéi)10-15分(fēn)鐘(zhōng)。

8）用PBS清(qīng)洗(xǐ)並(bìng)染色（如0.1%結晶(jīng)紫(zǐ)染(rǎn)色或(huò)DAPI染色(sè)）。

9）用(yòng)棉簽(qiān)擦(cā)去(qù)上(shàng)室膜上(shàng)的未遷移細(xì)胞(bāo)。使(shǐ)用顯(xiǎn)微鏡(jìng)觀(guān)察下(xià)室膜上(shàng)的遷移細胞(bāo)，並拍(pāi)攝圖像。計(jì)數(shù)多個(gè)視野中的遷(qiān)移(yí)細(xì)胞數，計算平均值。

10）匯總遷(qiān)移細(xì)胞(bāo)數量(liáng)，進行(háng)統計分析，繪(huì)製細(xì)胞(bāo)遷移圖。

結果(guǒ)圖展示

注意事項請(qǐng)點(diǎn)擊(jī)跳(tiào)轉：

三(sān)，實驗(yàn)中(zhōng)會用到的PBS推(tuī)薦

有需要(yào)PBS請聯係(xì)中(zhōng)科(kē)百抗代理——天津(jīn)益元(yuán)利康(kāng)生(shēng)物科技有(yǒu)限(xiàn)公(gōng)司(sī)！