一，產品介(jiè)紹(shào) 

【中(zhōng)文(wén)名稱(chēng)】

【英(yīng)文名(míng)稱(chēng)】Human γδT cell robust expasion kit 

【編(biān)號(hào)】 CT-004 

【包(bāo)裝規格(gé)】 2L/套(tào)

【試劑(jì)盒組成(chéng)】

【預期用途(tú)】

適用於從(cóng)人新(xīn)鮮(xiān)外周血，濃縮白細胞來(lái)源的(dí)單(dān)個核細胞以及凍(dòng)存(cún)的單個(gè)核細(xì)胞在體外(wài)擴增(zēng)成 γδT 細胞(bāo)。

【貯藏(cáng)條(tiáo)件與有效期】GD-I
，GD-II
，GD-IV 置於(yú) 2-8°C 保存
，有(yǒu)效期為 12 個(gè)月(yuè)；GD-III 置(zhì)於-20°C 保存
， 有效期為(wéi) 24 個(gè)月
，置於 2-8°C 保存(cún)
，有效(xiào)期則為 3 個月
，並勿反復凍融； 生(shēng)產日期(qī)
，有效期(qī)至：見標簽(qiān)。

【產(chǎn)品(pǐn)特性】 γδT 細胞(bāo)具有在體內(nèi)快速反(fǎn)應(yīng)的(dí)特(tè)性(xìng)
，在(zài)受(shòu)到刺激(jī)時(shí)
，會(huì)先於(yú) αβ-T 細胞(bāo)釋放促炎性(xìng)細(xì)胞因子 （IFN-γ 和 TNF-α 等(děng)）。γδT 細(xì)胞能夠(gòu)激活(huó) NK 細(xì)胞(bāo)的腫瘤細胞(bāo)毒作(zuò)用(yòng)
，與(yǔ) DC 細胞互(hù)刺激成熟(shú)
， APC 細胞抗(kàng)原呈(chéng)遞(dì)的功能
，激(jī)活(huó) αβ-T 細胞的免疫(yì)效應
，γδT 細(xì)胞的(dí)殺(shā)傷作(zuò)用(yòng)具(jù)有(yǒu)非(fēi) MHC 限(xiàn)製性
， 廣(guǎng)泛(fàn)的(dí)殺(shā)瘤譜(pǔ)
，已(yǐ)知對(duì)至少(shǎo)十(shí)幾種腫(zhǒng)瘤細(xì)胞(bāo)有殺傷(shāng)作(zuò)用。 γδT 細胞在人(rén)外(wài)周(zhōu)血(xiě)含量(liáng)很少(shǎo)（1-5%）
，本產品(pǐn)能夠(gòu)將(jiāng)外周(zhōu)血中(zhōng)的單(dān)個核(hé)細(xì)胞大規模擴增成 γδT 細胞
，具(jù)有擴(kuò)增效率高
，目(mù)的(dí)細(xì)胞百分(fēn)比高的(dí)特點
，起(qǐ)始(shǐ)單個核細胞經過(guò) 14 天培養
，總細(xì)胞 數可以(yǐ)擴(kuò)增約(yuē) 30±10 倍(bèi)左(zuǒ)右
，γδT 細胞其(qí)純度(dù)可(kě)達 80%左右
，並且全(quán)程無(wú)血(xiě)清培養(yǎng)為基礎和臨(lín)床 研(yán)究(jiū)使用 γδT 細胞提供一(yī)個有力(lì)的產品。

二，操作步(bù)驟

1. 第 0 天
，將(jiāng)製(zhì)備好的單個核(hé)細(xì)胞（MNC）按 1.5-2.0M cells/mL 細胞(bāo)密度鋪於 T-75 瓶中(zhōng)
，加 入 GD-IV 培養基 45mL
，GD-I 500μL
，GD-II 100 μL
，GD-III 5mL 以及濃度(dù)為 100 萬(wàn) IU/mL 的 IL-2 50μL（即 IL-2 終濃度(dù)為 1000IU/mL）； 注意：

1）IL-2 使用(yòng) 1mL GD-IV 培養基溶解（IL-2 溶解後濃度為(wéi) 100 萬 IU/mL）
，存於 2-8°C 冰箱
， 存放時(shí)間不超過兩周。建議將(jiāng) IL-2 溶解(jiě)後分裝於(yú)無菌試(shì)劑管(guǎn)後(hòu)保存於-20°C 冰箱
，使(shǐ)用時(shí)溶解 即可(kě)
，注意不要反(fǎn)復(fù)凍融
，且(qiě)不可使(shǐ)用(yòng)長(cháng)期(qī)置(zhì)於(yú) 2-8°C 的 IL-2
，否(fǒu)則將(jiāng)嚴重(zhòng)影響(xiǎng)本試(shì)劑(jì)盒的(dí)擴 增(zēng)效果；

2）請(qǐng)勿(wù)將 GD-III 從(cóng)-20°C 冰箱中取(qǔ)出(chū)後直接置於 37°C 中(zhōng)
，GD-III 溶(róng)解(jiě)wan全(quán)後(hòu)
，輕(qīng)輕(qīng)搖晃瓶(píng) 身
，使其(qí)溫度(dù)與成份均一
，搖(yáo)晃(huǎng)時
，請小心避免氣(qì)泡產生(shēng)；

  3）在(zài)細(xì)胞(bāo)鋪加後(hòu)與(yǔ)第(dì) 3 天補液之前(qián)的(dí)這段時間內(nèi)
，盡可能不要移(yí)動(dòng)培養(yǎng)瓶
，以免使(shǐ)其受(shòu)到溫度(dù) 變(biàn)動(dòng)
，震(zhèn)蕩(dàng)等物(wù)理因素的(dí)幹擾。

2. 第 3 天（3×24h）
，補加 95ml GD-IV 培養基(jī)
，GD-III 5mL
，IL-2 100μL（即 IL-2 終(zhōng)濃度為 1000IU/mL）轉(zhuǎn)入(rù)細胞培(péi)養(yǎng)袋
，此時袋子含(hán) 150mL 培養液； 注(zhù)意：為(wéi)使更多的細(xì)胞(bāo)轉入(rù)到培養袋(dài)中(zhōng)
，可先(xiān)將(jiāng) T-75 瓶中(zhōng)的(dí)細(xì)胞吹(chuī)打均(jūn)匀(yún)
，全(quán)部轉入培(péi)養(yǎng)袋(dài)中
， 再(zài)用部分新(xīn)鮮(xiān)配(pèi)製的(dí)培養液潤洗培養瓶(píng)
，並再次(cì)轉(zhuǎn)入(rù)培(péi)養袋中
，最後補齊培養液即可(kě)；

3. 第 5 天
，往(wǎng)培(péi)養袋補(bǔ)加(jiā) 150mL GD-IV 培養(yǎng)基
，GD-III 7.5mL
，IL-2 150μL（即 IL-2 終濃度(dù)為(wéi) 1000IU/mL）
，此(cǐ)時袋(dài)子(zǐ)含 300mL 培養(yǎng)液(yè)；

4. 第 7 天
，往(wǎng)培養(yǎng)袋(dài)補加(jiā) 300mL GD-IV 培(péi)養基(jī)
，剩餘(yú)的 GD-III
，IL-2 300μL（即(jí) IL-2 終濃度(dù) 為 1000IU/mL）
，然(rán)後(hòu)分(fēn)成兩(liǎng)袋(dài)
，此時每個袋(dài)子含 300mL 培(péi)養(yǎng)液；

5. 第(dì) 9 天
，分別往培(péi)養袋(dài)補加(jiā) 300ml GD-IV 培養(yǎng)基
，IL-2 300μL（即 IL-2 終(zhōng)濃度為 1000IU/mL）
， 此時袋子(zǐ)含 1100mL 培養(yǎng)液(yè)； 注(zhù)意(yì)：D5-9 為細(xì)胞增殖高峰(fēng)期(qī)
，補液時注意根據細(xì)胞生(shēng)長狀(zhuàng)態(tài)和(hé)密(mì)度(dù)添(tiān)加培養基(jī)以保(bǎo)持(chí)細胞(bāo)良 好生(shēng)長(cháng)狀態(tài)。

6.第 11 天
，分別往每個(gè)培養袋(dài)補(bǔ)加 400mL GD-IV 培養基(jī)
，IL-400μL（即(jí) IL-2 終濃(nóng)度(dù) 1000IU/mL） 

7.第 13-14 天(tiān)
，收獲目(mù)的細胞(bāo)。

注(zhù)意(yì)事(shì)項：

1）在使用本試(shì)劑盒時(shí)
，可先(xiān)將 GD-I 與 GD-II 試(shì)劑(jì)管低(dī)速(sù)離心（如 1000g/min 離(lí)心 1min 等）
， 確(què)保試劑(jì)足(zú)量；

2）由於(yú)樣(yàng)本之(zhī)間(jiān)的差(chà)異性
，在(zài)按(àn)上述操作(zuò)說明操(cāo)作(zuò)時(shí)
，可(kě)根據具體細(xì)胞生(shēng)長(cháng)狀態
，調整(zhěng)補(bǔ)液時 間；

  3）在(zài)使(shǐ)用本(běn)試劑盒時
，由於(yú)樣本(běn)之(zhī)間(jiān)的(dí)差(chà)異性(xìng)
，每個樣(yàng)本的細(xì)胞長速(sù)與(yǔ)誘導率存在差(chà)異(yì)。

 如需(xū)要(yào)
，請聯係(xì)——天津(jīn)益元利康(kāng)生(shēng)物科技有限公(gōng)司(sī)。