PCR嵌合體(Chimeric Products)：PCR擴增(zēng)反應中(zhōng)的(dí)嵌合(hé)體是指(zhǐ)一個PCR產物來自兩個或(huò)多個模板(bǎn)分(fēn)子，通常是(shì)由(yóu)於(yú)延伸未(wèi)完quan導(dǎo)致(zhì)的‌。這(zhè)種現象(xiàng)通常發(fā)生在PCR反應中(zhōng)，特(tè)別是(shì)當使(shǐ)用多重(zhòng)PCR或復雜(zá)模板(bǎn)時(shí)。嵌合(hé)體會(huì)導致擴增(zēng)產(chǎn)物(wù)中(zhōng)含有(yǒu)非(fēi)預期(qī)的片段，有(yǒu)可(kě)能(néng)會影響實驗結(jié)果的準確(què)性，甚至(zhì)導致錯誤的(dí)解釋(shì)。

在(zài)PCR反(fǎn)應(yīng)中(zhōng)，DNA模板在高溫下解(jiě)旋(xuán)成單鏈，然(rán)後(hòu)在低(dī)溫(wēn)下引(yǐn)物(wù)與(yǔ)單鏈按(àn)鹼(jiǎn)基互補配對(duì)的原(yuán)則(zé)結(jié)合。當(dāng)DNA聚(jù)合酶(méi)在延(yán)伸階段未能wanquan復(fù)製某個序(xù)列(liè)時，該(gāi)部分序(xù)列(liè)在下(xià)一輪PCR反應中作為引物(wù)繼(jì)續延伸，從而與其他序列(liè)混合，形成嵌(qiàn)合體序列(liè)‌。具(jù)體來說，DNA聚合酶(méi)在擴(kuò)增某(mǒu)一片段時，可能會在模(mó)板(bǎn)鏈的某(mǒu)個位(wèi)置(zhì)發(fā)生“跳躍"，將一(yī)個(gè)模(mó)板DNA片段與(yǔ)另一(yī)個模(mó)板片段(duàn)拼接，從(cóng)而生(shēng)成(chéng)嵌合體產物。嵌(qiàn)合(hé)體可(kě)以(yǐ)通(tōng)過(guò)多種機製形成，但(dàn)大多數嵌合體(tǐ)被認(rèn)為是由於(yú)擴(kuò)增(zēng)不(bù)完(wán)整而(ér)引起的(dí)

常(cháng)見(jiàn)的情況(kuàng)有以下三種(zhǒng)：

在PCR中，如(rú)果(guǒ)存在多個(gè)不同的模板(bǎn)DNA，它們的(dí)片段可能(néng)在(zài)擴增過(guò)程中偶(ǒu)然(rán)地(dì)組合(hé)在一(yī)起。具(jù)

引(yǐn)物(wù)二(èr)聚體是引物(wù)分子自我結(jié)合(hé)形(xíng)成的二聚(jù)體(tǐ)。如(rú)果(guǒ)PCR引物設(shè)計不當，或(huò)者引(yǐn)物濃度過(guò)高，可能會導致引(yǐn)物(wù)二聚體的產生(shēng)，這(zhè)些二聚體(tǐ)可(kě)能(néng)會參與(yǔ)擴增(zēng)過(guò)程，導致非特(tè)異性的擴增。在(zài)某些(xiē)情(qíng)況下(xià)，DNA聚(jù)合酶(méi)在復製錯(cuò)誤的引(yǐn)物(wù)二(èr)聚(jù)體(tǐ)或(huò)非(fēi)特異(yì)性產(chǎn)物(wù)時，也可能會形成嵌(qiàn)合體。

DNA聚合酶在延伸(shēn)過(guò)程中(zhōng)，有(yǒu)時會發(fā)生“跳躍"或(huò)“滑移(yí)"，從一(yī)個(gè)模(mó)板區域(yù)轉移(yí)到(dào)另一個(gè)模板區域，這種現(xiàn)象通(tōng)常(cháng)發生(shēng)在(zài)復(fù)雜(zá)的(dí)，含(hán)有重(zhòng)復序列或相似序列(liè)的(dí)區(qū)域(yù)。例如(rú)，如果(guǒ)模(mó)板中(zhōng)存(cún)在(zài)相似的序(xù)列(常見的(dí)擴(kuò)增子(zǐ)測(cè)序)，聚合酶可能會錯(cuò)誤(wù)地“切換"到另一條模板鏈，導致不(bù)同(tóng)片(piàn)段的(dí)連接(jiē)，從(cóng)而(ér)產(chǎn)生嵌(qiàn)合(hé)體(tǐ)。

總結：

通(tōng)常在PCR過(guò)程(chéng)中，大概有(yǒu)1%的幾(jī)率會出現(xiàn)嵌合(hé)體序(xù)列(liè)，而以在16S/18S/ITS 擴增子測序的(dí)分析中，係統相似度(dù)很高，當擴增(zēng)相(xiāng)似(sì)序列時(shí)，嵌合體(tǐ)可達1%-20%，需(xū)要去(qù)除嵌合(hé)體序列(liè)。

嵌(qiàn)合體的(dí)比例與PCR循(xún)環數相關，循環數(shù)越(yuè)高(gāo)，嵌合(hé)體(tǐ)比(bǐ)例(lì)越高(gāo)。

• 使(shǐ)用純(chún)淨，單一來(lái)源(yuán)的模板，避免多重模板(bǎn)

• 優化引(yǐn)物(wù)設(shè)計(jì)，確(què)保(bǎo)引(yǐn)物(wù)特異性(xìng)，避(bì)免(miǎn)引物二(èr)聚(jù)體(tǐ)產生

• 降(jiàng)低PCR反應溫(wēn)度和(hé)優化(huà)擴增條件(jiàn)

• 減少PCR循環(huán)次(cì)數(shù)

• 使(shǐ)用(yòng)高(gāo)保真(High-Fidelity)DNA聚合(hé)酶

• 使用(yòng)有限(xiàn)的(dí)DNA模(mó)版量(liáng)

怎麼(mó)判斷(duàn)你的(dí)PCR產(chǎn)物(wù)中(zhōng)有沒有嵌(qiàn)合體(tǐ)呢？可以使(shǐ)用(yòng)以(yǐ)下方法進行檢(jiǎn)測：

凝(níng)膠電(diàn)泳：通過凝(níng)膠(jiāo)電泳查看(kàn)PCR產物的(dí)大小(xiǎo)和模(mó)式，若出現多(duō)個不一致的(dí)條帶(dài)或(huò)意外的(dí)遷移(yí)模式(shì)，可能(néng)意味著(zhuó)嵌合體的(dí)存在。

測序：對PCR產物(wù)進行DNA測序。通(tōng)過(guò)對比(bǐ)測序(xù)結果與預(yù)期的目標序列，可以(yǐ)檢測(cè)到嵌合體的存在(zài)，並分(fēn)析(xī)嵌合體的組(zǔ)成(chéng)。

限製性酶切分(fēn)析(xī)：如果知(zhī)道嵌合(hé)體的(dí)可能(néng)位置，可(kě)以使用限製性內切酶切(qiē)割PCR產(chǎn)物(wù)，分(fēn)析切割結(jié)果是(shì)否(fǒu)符合(hé)預期。（如需凝(níng)膠(jiāo)電泳產品，，測序(xù)試劑(jì)盒(hé)，請(qǐng)聯係天津益(yì)元利康生物(wù)科(kē)技(jì)有限(xiàn)公(gōng)司(sī)）