我們(mén)知道環(huán)境(jìng)中廣泛(fàn)存(cún)在的格(gé)蘭氏陰(yīn)性菌容易(yì)汙(wū)染生產(chǎn)過程，其裂(liè)解後會(huì)釋放出內(nèi)毒(dú)素(sù)，因(yīn)內毒素(sù)耐熱性和(hé)化學(xué)穩(wěn)定性強而(ér)難以滅活，所(suǒ)以一(yī)旦(dàn)有內(nèi)毒素(sù)汙染(rǎn)進入血液(yè)，即使(shǐ)極少量也能引起發熱(rè)休克等嚴重(zhòng)反(fǎn)應，因而(ér)內(nèi)毒(dú)素與其他已知(zhī)熱(rè)原汙染(rǎn)物(wù)相比，顯示更強的熱原性。

而(ér)熱原(yuán)檢測不同(tóng)於(yú)無菌(jūn)檢測，兩者應同時進行(háng)。無菌檢測(cè)通常(cháng)檢測(cè)微(wēi)生物(wù)產生(shēng)的活生物體或孢子(zǐ)，但無法(fǎ)檢測(cè)內毒素(sù)，隻能進(jìn)行熱原檢(jiǎn)測(cè)。下麵我(wǒ)們來(lái)簡單(dān)了解有(yǒu)哪些檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的(dí)不(bù)同方(fāng)法有家兔(tù)熱(rè)原(yuán)檢(jiǎn)查法，凝膠(jiāo)法(鱟(hòu)試(shì)劑)，光度(dù)測定(dìng)法(fǎ)(鱟試劑)，重(zhòng)組(zǔ)C因(yīn)子(zǐ)法等(děng)

一，家(jiā)兔熱原(yuán)檢(jiǎn)查(chá)法

20世(shì)紀(jì)40年(nián)代，第12版美(měi)國藥典中(zhōng)納(nà)入了第(dì)一(yī)個基(jī)於兔子模型(xíng)的熱(rè)原(yuán)實(shí)驗。兔子熱(rè)原(yuán)測試是將樣本(běn)注(zhù)射到多(duō)隻兔(tù)子體內，致熱(rè)物(wù)質的存在導致(zhì)兔子(zǐ)在注射3-6 h後(hòu)發(fā)熱(rè)。兔(tù)子熱原(yuán)試驗(RPT)的(dí)基(jī)礎(chǔ)是測(cè)量兔(tù)子在(zài)靜(jìng)脈內注(zhù)射待測樣(yàng)品的無菌(jūn)溶(róng)液後(hòu)溫度(dù)的升(shēng)高。如(rú)果樣品(pǐn)中含(hán)有(yǒu)熱原，兔(tù)子的體溫(wēn)會升高(gāo)0.6℃。

優點: 可(kě)以(yǐ)檢測(cè)所有(yǒu)類(lèi)型的熱原(yuán)物(wù)質；

缺點(diǎn): 動物個(gè)體(tǐ)差(chà)異大導致(zhì)檢(jiǎn)測(cè)靈(líng)敏度低；對(duì)於毒性大的藥物(wù)如(rú)放射性藥(yào)物(wù)或(huò)腫瘤(liú)抑製(zhì)劑等，無法進行(háng)檢測；定性而非定(dìng)量(liáng)方法，不(bù)能(néng)用(yòng)於藥(yào)品生(shēng)產(chǎn)過程中的質(zhì)量控製。

二， 鱟試(shì)劑(jì)檢查法

20世(shì)紀70年代，分為凝(níng)膠法，濁度法和(hé)顯色(sè)基質(zhì)法。這(zhè)是(shì)一種使(shǐ)用鱟(hòu)變形(xíng)細胞(bāo)裂解(jiě)物測定內(nèi)毒素(sù)的(dí)體(tǐ)外方(fāng)法(fǎ)。主要試(shì)劑鱟變(biàn)形細胞(bāo)裂解物(LAL)是(shì)從(cóng)鱟(Limulus polyphemus)中提取的血細(xì)胞(變(biàn)形細胞)的(dí)水提取物(wù)。鱟(hòu)試劑法(fǎ)的反(fǎn)應機理是細菌內毒素(sù)在二價陽離(lí)子(zǐ)參(cān)與(yǔ)下(xià)激活(huó)鱟(hòu)血(xiě)細胞溶解物中的(dí)一係(xì)列凝聚酶的反(fǎn)應。

優點(diǎn): 易操作(zuò)，靈(líng)敏度高，可用於內毒素(sù)定量(liáng)檢測；

缺(quē)點(diǎn): 鱟血批次間有(yǒu)差異；對(duì)革蘭(lán)氏陰性菌以外的(dí)內毒素不靈敏(mǐn)；易(yì)受β-葡聚(jù)糖(β-Glucans)影(yǐng)響(xiǎng)而產(chǎn)生(shēng)假陽(yáng)性(xìng)；鱟受到(dào)動物保護，無法大批(pī)量供應。

【——天(tiān)津(jīn)益元利(lì)康生(shēng)物(wù)科技(jì)有限(xiàn)公(gōng)司】

三(sān)， 重(zhòng)組C因子(zǐ)法

21世紀初，通過重組方法產(chǎn)生C因(yīn)子(zǐ)。因(yīn)子(zǐ)C是由(yóu)內毒(dú)素結(jié)合(hé)激活的級聯(lián)反應的(dí)第(dì)一(yī)個成分，C因子激活(huó)B因子。另(lìng)一(yī)種替代(dài)途徑是(shì)G因(yīn)子被葡聚糖(táng)結合激活(huó)。C因子和(hé)G因(yīn)子都(dū)將促凝血(xiě)酶轉變為凝血(xiě)酶(méi)。C因子(zǐ)可(kě)以選(xuǎn)擇性(xìng)地識別(bié)內毒素(sù)並觸發(fā)蛋白酶(méi)級(jí)聯(lián)反(fǎn)應。因子(zǐ)C已(yǐ)被(bèi)純化和(hé)克(kè)隆以(yǐ)創建內毒(dú)素特(tè)異性測定(dìng)。

優點(diǎn): C因(yīn)子來源(yuán)穩定(dìng)，受(shòu)批(pī)次影響(xiǎng)小(xiǎo)；操作簡單(dān)快(kuài)速；更強(qiáng)的抗幹擾能(néng)力(不(bù)受β-glucans影(yǐng)響)；專屬性(xìng)好。

缺(quē)點: 來源於不同(tóng)品種鱟血(xiě)蛋白(bái)序(xù)列(liè)的重組蛋(dàn)白對內毒(dú)素的(dí)反應(yīng)性(xìng)可(kě)能不(bù)同。

rFC檢測的原理(lǐ)是內(nèi)毒素結合(hé)會(huì)激(jī)活重組C因(yīn)子。這種活性結(jié)合(hé)會裂解(jiě)合成(chéng)底(dǐ)物，從而產生熒(yíng)光(guāng)化(huà)合物，該(gāi)測定在96孔(kǒng)板(bǎn)上進行。使(shǐ)用380/440nm的激發波(bō)長，在零時和(hé)37℃±1℃下孵育一(yī)小(xiǎo)時後(hòu)，在微(wēi)孔板(bǎn)讀(dú)數中(zhōng)測量熒光(guāng)。對數淨熒光(guāng)(1 h和時間零讀(dú)數之(zhī)間的差(chà)異=ΔRFU)與對數內毒素濃度(dù)成正比，並且(qiě)在0.005-5.0EU/ml範(fàn)圍內呈綫性關係。

四， 單核細(xì)胞(bāo)活(huó)化(huà)試(shì)驗

單核(hé)細(xì)胞激活(huó)試驗(MAT)有助於檢測(cè)和(hé)量(liáng)化(huà)激活(huó)人(rén)類單(dān)核細胞以(yǐ)釋放負(fù)責發(fā)燒(shāo)反應的介(jiè)質的物(wù)質(zhì)。該測試(shì)探索(suǒ)人(rén)類發燒反應，提(tí)供比RPT更(gēng)好的熱(rè)源活動(dòng)信息。該測試(shì)不僅可(kě)以確(què)定內(nèi)毒素熱(rè)原(yuán)，還(huán)可以幫(bāng)助確(què)定非內毒素(sù)熱原。

MAT測試可檢測細(xì)胞(bāo)因(yīn)子(zǐ)，前列(liè)腺(xiàn)素(sù)(IL-1/IL-3)和由單核細(xì)胞激(jī)活(huó)的致熱物質產(chǎn)生的腫(zhǒng)瘤壞(huài)死因子(zǐ)α(TNF-α)。然後使用ELISA(酶聯(lián)免疫吸(xī)附測定(dìng))檢測這些(xiē)白(bái)細胞(bāo)介素。

MAT的(dí)一(yī)般(bān)原理(lǐ)為(wéi)熱(rè)原+人類(lèi)白細胞→白(bái)細(xì)胞介素(sù) →使用ELISA檢(jiǎn)測並以(yǐ)IU/ml進行定(dìng)量(liáng)。MAT的(dí)一(yī)般(bān)程序(xù)包括三個基本(běn)步驟: 激活單核(hé)細胞(bāo)，孵育(yù)產生IL-6，並使用(yòng)軟件(jiàn)進行定量(liáng)分析。

——天津益(yì)元(yuán)利康(kāng)生物科技有限(xiàn)公(gōng)司，提(tí)供AAT Bioquest 產(chǎn)品(pǐn)，如(rú)檢(jiǎn)測(cè)試劑(jì)盒，蛋(dàn)白質，抗體(tǐ)等(děng)，歡迎(yíng)咨詢！

AAT Bioquest內毒素(sù)檢(jiǎn)測(cè)試劑(jì)盒部(bù)分產品(pǐn)列表：

一，輻射(shè)五大服務方向(xiàng)：

1.國(guó)內試劑耗材經銷代理；

2.國(guó)外(wài)試劑訂(dìng)購（直(zhí)訂(dìng)，或境(jìng)外(wài)代理）；

3.基因組測序（二代(dài)，二(èr)代+三代(dài)）；

4.基因(yīn)分型（SNP檢(jiǎn)測）：低(dī)/中(zhōng)/中(zhōng) 高(gāo)通量項目；

5.生(shēng)物(wù)樣(yàng)本(běn)運輸(shū)（國內(nèi)，）；

二，多(duō)家(jiā)代(dài)理(lǐ)品(pǐn)牌，涉(shè)及30多種較(jiào)有名品牌(pái)，經(jīng)營(yíng)代理500多個(gè)品牌(pái)：

Qiagen，Sigma，R&D，Epigentek，ThermoFisher，DNA Genotek，USA Scientific，Matreya，Sage Science，List Labs，Macrocyclics，Steraloids，NIBSC，mobio，immunodx，cellsystems，medicago，abcam，CST，Roche，Bethyl，sino Biological，clodrosome，adi BIO-WORLD，TOKU-E，HYPHEN BioMed，moltox，ZeptoMetrix，International Humic，biocytex，Toxin Technology  ，Streck，Elastin，biomax，Orflo Technologies，Accegen，Advbiomart，genlantis，R&D，Cygnus Technologies LLC，Enzyme Research，Bio/Data Corporation，Greer Lab ，Solarbio，bangslabs，bioline，musechem，Novocastra stemrd，hyphen-biomed，polyplus，moltox ，exiqon，pentapharm，verichemlabs，GenStar，ALZET，lucernatechnologies ，meridian，origene，zimmerpeacocktech，horizondiscovery，Reagents，megazyme，elisasystems………

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