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更新時(shí)間：2025-02-06
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一，懸浮(fú)細胞都有什麼？
懸浮生(shēng)長(cháng)的細胞(bāo)是(shì)指在(zài)體外培養時(shí)不(bù)依賴於支(zhī)持物(wù)表麵(miàn)，而是在(zài)培(péi)養(yǎng)液(yè)中(zhōng)以懸(xuán)浮(fú)狀(zhuàng)態(tài)生(shēng)長的(dí)細(xì)胞(bāo)。這(zhè)類(lèi)細胞通常來源(yuán)於(yú)血(xiě)液，淋巴(bā)組(zǔ)織，例如(rú)某些(xiē)腫(zhǒng)瘤細(xì)胞和轉化(huà)細(xì)胞。懸浮細胞的特點是(shì)細胞(bāo)呈(chéng)圓(yuán)形，一般不(bù)貼(tiē)於支(zhī)持(chí)物(wù)上，易於大(dà)量繁殖。在體(tǐ)外(wài)培(péi)養的細胞(bāo)類(lèi)型(xíng)中，懸浮(fú)細(xì)胞可(kě)以(yǐ)呈單個細胞或細小的細(xì)胞團(tuán)生(shēng)長。
以(yǐ)下是一(yī)些常見(jiàn)的(dí)懸浮生長細胞類(lèi)型：
小(xiǎo)鼠腹(fù)水瘤 S180
小(xiǎo)鼠骨髓瘤 NS1 和(hé) SP2/0
人造(zào)血係(xì)腫瘤細胞 U937，HL60，K562
人(rén)原髓(suǐ)細胞(bāo)白血病細(xì)胞(bāo) HL-60
小(xiǎo)鼠白血病(bìng)細胞(bāo) WEHI-3
人白血病(bìng)細胞(bāo) K-562
此外，還有(yǒu)一(yī)些(xiē)工(gōng)業(yè)上(shàng)應(yīng)用的(dí)細胞係(xì)，如 CHO，BHK，HEK293 等(děng)，這些細(xì)胞(bāo)主要(yào)用於(yú)重組(zǔ)蛋白質生產(chǎn)。在獸(shòu)用生(shēng)物製品(pǐn)中，常用(yòng)的(dí)懸浮培養的(dí)細胞係(xì)包括(kuò) BHK21 和 MDCK 細胞(bāo)。
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二(èr)，懸浮細(xì)胞(bāo)的轉染(rǎn)
1.提(tí)一天將(jiāng)細胞接種6孔板，每(měi)孔(kǒng)細胞數(shù)約為3×105 個(gè)，
2.第(dì)二(èr)天(tiān)，換液後加入1mL培養(yǎng)基(jī)，再加(jiā)20 μL 慢(màn)病毒，
3.混(hùn)匀後繼(jì)續(xù)培養(yǎng)，
4.12h後觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)，並(bìng)更(gēng)換為(wéi)新(xīn)鮮培(péi)養(yǎng)基(jī)，
5.轉染1周後，觀察(chá)細(xì)胞生(shēng)長(cháng)情況(kuàng)，中(zhōng)途(tú)可(kě)以換液，保(bǎo)持(chí)細胞(bāo)的(dí)活(huó)性(xìng)。
轉染（Transfection）是(shì)指將DNA或(huò)者RNA導入(rù)真核(hé)細(xì)胞中的(dí)過程。轉(zhuǎn)染的目(mù)的是(shì)產生(shēng)重組(zǔ)蛋白，或特異性(xìng)增(zēng)強(qiáng)或(huò)抑(yì)製轉(zhuǎn)染細胞中(zhōng)的基(jī)因(yīn)表達(dá)。細胞(bāo)轉染有(yǒu)哪些類(lèi)型和(hé)方法呢？
1）根據(jù)導入的核酸(suān)存在(zài)於宿(sù)主細(xì)胞的時(shí)間長(cháng)短，可(kě)以(yǐ)分為(wéi)瞬轉和(hé)穩轉(zhuǎn)。
| 瞬(shùn)轉 | 穩轉 |
導入(rù)的DNA沒(méi)有(yǒu)整(zhěng)合(hé)到(dào)基因組中(zhōng)，而是保留(liú)在細(xì)胞核上 | 導入的(dí)DNA整(zhěng)合(hé)到(dào)基因組中(zhōng) |
導入(rù)的遺傳物質不傳(chuán)遞到子(zǐ)代； 遺(yí)傳(chuán)改變隻是(shì)暫時的(dí) | 導入(rù)的遺(yí)傳物(wù)質能(néng)夠(gòu)代代相傳；遺傳(chuán)改(gǎi)變是的 |
不需(xū)要(yào)選(xuǎn)擇性篩選 | 需要選擇性篩(shāi)選出穩定(dìng)轉染的細胞 |
DNA載體和(hé)RNA都(dū)可用於瞬時轉染(rǎn) | 隻有(yǒu)DNA載(zǎi)體可(kě)用於(yú)穩定轉染(rǎn)；RNA本(běn)身不能穩定地(dì)導入(rù)細胞中(zhōng) |
導入(rù)的(dí)遺傳物(wù)質的(dí)高(gāo)拷貝(bèi)數(shù)導致(zhì)高(gāo)水(shuǐ)平的(dí)蛋白質表(biǎo)達(dá)。 | 單(dān)拷貝數(shù)或低拷貝數的(dí)穩定整(zhěng)合(hé)的DNA導(dǎo)致較低(dī)水平(píng)的(dí)蛋白質(zhì)表達(dá)。 |
通(tōng)常在轉染(rǎn)後(hòu)24-96小(xiǎo)時內收(shōu)獲細(xì)胞。 | 需要(yào)2-3周的時間(jiān)篩(shāi)選出(chū)穩(wěn)定(dìng)轉染的(dí)細(xì)胞(bāo)克隆。 |
通常不(bù)適(shì)合(hé)使用(yòng)具有誘導型(xíng)啟(qǐ)動子的載體的(dí)研(yán)究(jiū)。 | 適用(yòng)於(yú)使用(yòng)帶(dài)有(yǒu)誘(yòu)導型啟動子的載(zǎi)體(tǐ)的(dí)研(yán)究。 |
2）根據(jù)轉(zhuǎn)染(rǎn)方(fāng)式可以(yǐ)分為(wéi)化學，生物，物理(lǐ)方(fāng)法。
| 轉(zhuǎn)染類型 | 轉染(rǎn)方(fāng)法(fǎ) | 原(yuán)理 | 應用 | 特點(diǎn) |
| 化學轉(zhuǎn)染(rǎn)法 | 磷酸鈣(gài)法 | 磷酸(suān)鈣DNA復(fù)合(hé)物吸(xī)附細胞膜被細(xì)胞內吞 | 穩轉， 瞬轉(zhuǎn) | 不適(shì)用(yòng)於原代細(xì)胞，操作簡便但重復性差，有些細(xì)胞不適用(yòng) |
陽(yáng)離子 | 帶(dài)正(zhèng)電的脂(zhī)質(zhì)體與(yǔ)核酸(suān)帶負電的磷酸(suān)基(jī)團(tuán)形(xíng)成(chéng)復合物被細(xì)胞(bāo)內吞 | 穩轉， 瞬轉(zhuǎn) | 適用性廣，轉染效(xiào)率(shuài)高(gāo)，重復(fù)性好，但(dàn)轉染(rǎn)時(shí)需除血(xiě)清(qīng)。轉染效果隨(suí)細胞(bāo)類型變化(huà)大(dà) | |
DEAE-右旋糖(táng)苷法 | 帶(dài)正(zhèng)電的DEAE-右旋(xuán)糖苷(gān)與(yǔ)核(hé)酸(suān)帶(dài)負(fù)電的磷(lín)酸骨(gǔ)架相互(hù)作用形成的(dí)復合(hé)物被(bèi)細胞內(nèi)吞 | 瞬轉(zhuǎn) | 相(xiāng)對(duì)簡(jiǎn)便，結果可重復，但對細胞(bāo)有一(yī)定(dìng)的毒(dú)副作用，轉(zhuǎn)染(rǎn)時需除血(xiě)清(qīng) | |
| 生物轉入法 | 病毒介(jiè)導(dǎo)法(fǎ) | 通過(guò)侵(qīn)染(rǎn)宿主細胞(bāo)將外源基因整合到染(rǎn)色(sè)體中(zhōng) | 穩(wěn)轉 | 可(kě)用(yòng)於(yú)難轉(zhuǎn)染的(dí)細胞，原代(dài)細胞，體(tǐ)內細(xì)胞等 |
逆轉錄病毒(dú) | 特定宿主(zhǔ) | 但攜帶基(jī)因(yīn)不能太(tài)大(dà)細胞需處分裂期，需考(kǎo)慮(lǜ)安全(quán)因素 | ||
腺(xiàn)病毒 | 通過侵染宿主細(xì)胞(bāo)將(jiāng)外(wài)源基(jī)因整合到(dào)染(rǎn)色體(tǐ)中 | 瞬(shùn)時轉染 | 可(kě)用(yòng)於難(nán)轉染(rǎn)的(dí)細胞(bāo) | |
| 物理轉染法 | Biolistic顆(kē)粒(lì)傳遞(dì)法 | 將DNA用顯微(wēi)重金(jīn)屬顆(kē)粒沉澱(diàn)，再(zài)將(jiāng)包(bāo)被(bèi)好(hǎo)的顆(kē)粒(lì)用彈道裝(zhuāng)置(zhì)投(tóu)射入(rù)細胞(bāo)，DNA在胞內逐(zhú)步釋(shì)放表達(dá) | 瞬(shùn)轉(zhuǎn) | 可(kě)用於(yú)：人(rén)的(dí)表(biǎo)皮(pí)細(xì)胞，纖(xiān)維原細胞，淋(lín)巴細胞係(xì)以及原(yuán)代細胞(bāo) |
電(diàn)穿孔法(fǎ) | 高脈(mài)衝(chōng)電(diàn)壓破壞細(xì)胞膜電(diàn)位，DNA通過膜上形成的小孔導入 | 穩轉，瞬轉(zhuǎn) | 適用性(xìng)廣(guǎng)但細胞致死率高，DNA和細胞用量(liáng)大(dà) | |
顯(xiǎn)微注射法 | 用(yòng)顯(xiǎn)微操(cāo)作將DNA直(zhí)接注入(rù)靶細(xì)胞核 | 穩(wěn)轉，瞬轉 | 轉染(rǎn)細(xì)胞(bāo)數有(yǒu)限(xiàn)，多(duō)用(yòng)於工程改造或轉基(jī)因動(dòng)物(wù)的胚胎(tāi)細胞 |
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