慢病毒(dú)轉染貼壁(bì)細(xì)胞全(quán)流程(chéng)詳解

一，細(xì)胞種板(bǎn)

將(jiāng)細(xì)胞種在12孔板中，每孔1.5×10^5個細(xì)胞(bāo)。每孔加入(rù)1ml wan全(quán)培養基(jī)。
二，病毒(dú)感染

1. 待細胞生長至30%～50%時開始轉染(rǎn)。
2. 將病毒從冰箱取出(chū)，放在冰(bīng)上融(róng)化。
3. 打開生物安全櫃，關(guān)閉風(fēng)機，戴(dài)好(hǎo)帽(mào)子和(hé)口罩(zhào)。
4. 棄去(qù)培(péi)養(yǎng)基，用PBS洗三次。
5. 每(měi)孔(kǒng)加入(rù)500ul wan全培養基(jī)。
6. 根據(jù)公式計(jì)算(suàn)每孔(kǒng)所需(xū)病毒量：每孔(kǒng)病毒(dú)量（μL）= MOI x 細(xì)胞數 / 病毒滴度(dù)（TU/mL）× 1000。

7. 4小(xiǎo)時後，再向(xiàng)孔(kǒng)板中(zhōng)加(jiā)入(rù)500ul wan全培養基，補(bǔ)足(zú)1ml。

三，換液

 感(gǎn)染後24小時，吸(xī)去(qù)含病毒的培養(yǎng)液，換上(shàng)新(xīn)鮮(xiān)的 wan全(quán)培養液(yè)，繼續37℃培養。

四(sì)，觀察與篩(shāi)選(xuǎn)

感染後(hòu)48小時，通(tōng)過(guò)熒(yíng)光顯微鏡(jìng)初(chū)步觀察GFP表(biǎo)達(dá)效(xiào)率。一般(bān)感(gǎn)染後72小(xiǎo)時達到表(biǎo)達(dá)高峰。
對(duì)於(yú)攜帶Puromycin抗性基(jī)因的病(bìng)毒(dú)，換上含適當(dāng)濃(nóng)度Puromycin的新(xīn)鮮 wan全培(péi)養液(yè)，篩選(xuǎn)穩定(dìng)轉導的細(xì)胞(bāo)株。

天津(jīn)益元利(lì)康(kāng)生物科(kē)技有(yǒu)限(xiàn)公司：

（一(yī)）輻射五(wǔ)大服務方向(xiàng)：

1. 國(guó)內試劑耗材經銷(xiāo)代(dài)理；

2. 國(guó)外試劑訂(dìng)購（直(zhí)訂(dìng)，或(huò)境外代理）；

3. 基(jī)因組(zǔ)測序(xù)（二(èr)代，二(èr)代(dài)+三代(dài)）；

4. 基因分(fēn)型（SNP檢測(cè)）：低(dī)/中(zhōng)/中(zhōng) 高通量(liáng)項目；

5. 生物(wù)樣本運輸（國內，）；

（二）多家代理(lǐ)品牌，涉及(jí)30多(duō)種(zhǒng)較有名(míng)品(pǐn)牌，經(jīng)營(yíng)代(dài)理(lǐ)500多(duō)個(gè)品牌(pái)：

Qiagen，Sigma，R&D，Epigentek，ThermoFisher，DNA Genotek，USA Scientific，

Matreya，Sage Science，List Labs，Macrocyclics，Steraloids，NIBSC，mobio，immunodx，cellsystems，medicago，abcam，CST，Roche，Bethyl，sino Biological，clodrosome，adi BIO-WORLD，TOKU-E，HYPHEN BioMed，moltox，ZeptoMetrix International Humic，biocytex，Toxin Technology，Streck，Elastin，biomax，Orflo Technologies，Accegen，Advbiomart，genlantis，Cygnus Technologies LLC，Enzyme Research，Bio/Data Corporation，Greer Lab ，Solarbio，bangslabs，bioline，musechem，hyphen-biomed，polyplus，moltox ，exiqon，pentapharm，verichemlabs，GenStar，ALZET，lucernatechnologies ，meridian，origene，horizon discovery，Reagents，megazyme，elisasystems………

所(suǒ)有(yǒu)生(shēng)物試(shì)劑耗(hào)材都(dū)可(kě)以(yǐ)進(jìn)口(kǒu)，特別(bié)是冷門品牌(pái)，均(jūn)能給(gěi)客戶購買到。價格優，貨(huò)期(qī)短，可(kě)加(jiā)急(jí)，快10天到貨；保(bǎo)證服務(wù)質量，所(suǒ)有產品均(jūn)提供售後(hòu)服務。大部分客戶我們(mén)提(tí)供貨到(dào)付款(kuǎn)服務，

公司(sī)自(zì)成立依靠過(guò)硬的(dí)服(fú)務和(hé)良(liáng)好(hǎo)的信譽(yù)與各(gè)大(dà)企事業單位，科(kē)研單位建立長(cháng)期合作(zuò)。客戶包(bāo)括北(běi)大，清(qīng)華，地(dì)大(dà)，中(zhōng)科院各所，各(gè)大(dà)藥企(qǐ)等等(děng)。

專(zhuān)業(yè)訂購(gòu)國內外試劑耗材，常備現(xiàn)貨(huò)，一手(shǒu)貨源，歡(huān)迎(yíng)合(hé)作。