材料(liào)與儀器

植物組(zǔ)織
Trizol 氯(lǜ)仿 異丙醇 乙醇 DEPC處理過的水(shuǐ) 液態N2 NaCl 檸(níng)檬(méng)酸(suān)鈉
轉子-定(dìng)子(zǐ)均化(huà)器 研(yán)缽和(hé)杵 圓(yuán)錐形管(guǎn)

步(bù)驟

一，材料(liào)
1. 緩(huǎn)衝液(yè)，溶液(yè)和(hé)試(shì)劑
Trizol(Invitrogen)氯(lǜ)仿
異(yì)丙(bǐng)醇
乙醇(chún)，70%，用焦(jiāo)碳(tàn)酸二乙酯（DEPC) 處理過的水(shuǐ)配製(zhì)
DEPC 處理過的水，

液(yè)態 N2
NaCl,1.2mol/L
檸檬酸鈉(nà),0.8mol/L
2. 特殊設備(bèi)
轉子-定子(zǐ)均化器(qì)（或相當的(dí)）
研(yán)缽和杵(chǔ)，在 DEPC 處理(lǐ)過的水(shuǐ)中(zhōng)洗(xǐ)滌(dí)，液氮中(zhōng)預(yù)凍
50 ml 圓(yuán)錐(zhuī)形管，例如 Falcon
3. 細(xì)胞和(hé)組織(zhī)

合適的植物組織(zhī)
二，方法(fǎ)
1. 液氮預(yù)凍過的研缽中研(yán)磨約 1g 植物(wù)組織，操(cāo)作(zuò)時使(shǐ)用足夠(gòu)的液(yè)氮(dàn)淹(yān)沒植(zhí)物組織。
將(jiāng)組織研磨成很細的(dí)粉末，這(zhè)點很(hěn)重要。

2. 將粉(fěn)末轉移到 50 ml 圓錐形(xíng)管(guǎn)中，管中(zhōng)已按每克(kè)組織 10 ml 的(dí)量(liáng)加入 Trizol。
3. 使用(yòng)轉子-定(dìng)子均(jūn)化器均質化(huà)組(zǔ)織 30s。
4.4°C 下 1500 g 離心裂解產物 15 min 以移去(qù)殘渣。
5. 將上(shàng)清(qīng)液轉(zhuǎn)移到一(yī)新管中(zhōng)。每(měi)毫升 Trizol 加 200ul 氯仿(fǎng)。
6. 將管(guǎn)顛倒(dǎo)數(shù)次以(yǐ)混合。室(shì)溫(wēn)下溫育 5 min。
7.4°C 下(xià) 1500 g 離(lí)心 20 min。將上清(qīng)液轉移(yí)到一(yī)新的 50 ml 管中(zhōng)。
8. 加 0.5 倍(bèi)體(tǐ)積(jī)異丙酵和 0.5 倍(bèi)體積(jī)的 0.8mol/L 檸檬酸(suān)鈉(nà)，1.2mol/L 氯化(huà)鈉(nà)溶(róng)
例(lì)如(rú)，對(duì) 500ul 體積的(dí)液相而言，應加 250ul 異丙醇和 250ul 檸檬(méng)酸(suān)鈉溶液。
9 混(hùn)合，室(shì)溫(wēn)下溫(wēn)育(yù) 1min。於(yú)-20°C 保存(cún)過夜可提高 RNA 產(chǎn)量(liáng)。
10.4°C 下(xià) 1500 g 離(lí)心(xīn) 20 min。
11. 移(yí)棄(qì)上清液，每(měi)毫(háo)升(shēng) Trizol加(jiā) lml70% 乙醇(chún)，以(yǐ)進行初(chū)步抽提。
12.1500 g 離心 15 min。小心(xīn)移棄(qì)上(shàng)清(qīng)液(yè)，避免擾動(dòng)沉降(jiàng)物。將(jiāng)沉降(jiàng)物(wù)風(fēng)幹(gān)。
13. 將 RNA 溶解於 DEPC 處(chǔ)理過的水中(zhōng)。
lg 成熟(shú)葉(yè)組(zǔ)織的 RNA 產(chǎn)量可達 500ug。
這個(gè)方案(àn)對含多酚化合(hé)物(wù)或(huò)樹(shù)脂的(dí)植(zhí)物(wù)組(zǔ)織可能不適(shì)用。對富含(hán)多酚，樹(shù)脂(zhī)或澱粉的提(tí)取困難(nán)的(dí)植物組織，推薦(jiàn)使用(yòng) ConcertPlantReagent(Invitrogen)。

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