基(jī)因組DNA提(tí)取常見問(wèn)題
 

　　你(nǐ)知道基因組DNA提(tí)取(qǔ)的(dí)常(cháng)見(jiàn)問(wèn)題有(yǒu)哪(nǎ)些嗎？讓(ràng)我(wǒ)們(mén)一起(qǐ)來看看吧！
 

　　一(yī)
，DNA提(tí)取(qǔ)產(chǎn)量(liáng)低(dī)？
 

　　(1)實(shí)驗(yàn)材料量(liáng)太少。適當(dāng)增(zēng)加材料用(yòng)量(liáng)。
 

　　(2)樣(yàng)本(běn)裂解不充分(fēn)。適當減(jiǎn)少樣品量，用液(yè)氮(dàn)或(huò)匀(yún)漿器(qì)對樣(yàng)品進行研磨和(hé)匀(yún)漿，加(jiā)入(rù)裂解(jiě)液(yè)後(hòu)使其(qí)和樣品(pǐn)充分混(hùn)匀，適當(dāng)延(yán)長(cháng)裂解(jiě)時間(jiān)。
 

　　(3)提(tí)取材(cái)料質量不好。保(bǎo)證樣(yàng)品(pǐn)本(běn)身(shēn)DNA含量(liáng)，盡量(liáng)選用富含核(hé)酸(suān)的組(zǔ)織或新鮮組織提取(qǔ)基因(yīn)組DNA，樣品(pǐn)采(cǎi)集後(hòu)應(yīng)盡(jìn)快(kuài)保存在-80℃或(huò)液氮(dàn)中，避(bì)免(miǎn)樣(yàng)品反(fǎn)復(fù)凍融或保(bǎo)存時間(jiān)過久。若樣(yàng)品(pǐn)DNA含(hán)量較(jiào)少，即(jí)使電泳檢測不到(dào)明顯(xiǎn)的DNA條帶，仍可嘗(cháng)試(shì)進(jìn)行PCR檢測(cè)，建議(yì)使用靈(líng)敏度(dù)高(gāo)的(dí)酶進(jìn)行擴增。
 

　　(4)DNA斷裂或(huò)降解。避免(miǎn)因(yīn)移(yí)液槍反復吹吸或(huò)反復(fù)凍(dòng)融樣品(pǐn)造成的DNA損(sǔn)傷(shāng)，及(jí)避(bì)免(miǎn)在操(cāo)作(zuò)過(guò)程中帶入外源(yuán)DNase汙染。
 

　　(5)若采用(yòng)試(shì)劑盒(hé)法(吸附柱(zhù)法)提(tí)取基(jī)因組DNA，還有可(kě)能(néng)因(yīn)為部(bù)分(fēn)試(shì)劑(jì)未添(tiān)加無(wú)水乙醇。使(shǐ)用前(qián)必(bì)須按規定量(liáng)添加(jiā)無水(shuǐ)乙醇(chún)，溶(róng)液(yè)使(shǐ)用(yòng)完後立(lì)即(jí)蓋緊蓋子(zǐ)。
 

　　二
，提取的(dí)基因(yīn)組(zǔ)DNA純(chún)度低，影響(xiǎng)下(xià)遊(yóu)酶切(qiē)
，PCR等實驗？
 

　　(1)DNA中含有蛋白
，多糖(táng)
，多酚類(lèi)雜(zá)質(zhì)。重(zhòng)新(xīn)純(chún)化(huà)DNA，去(qù)除殘留蛋白和(hé)糖酚。
 

　　(2)DNA在(zài)溶(róng)解前，有乙(yǐ)醇殘留抑(yì)製後(hòu)續(xù)酶反應(yīng)。重(zhòng)新沉澱(diàn)DNA，充(chōng)分揮發(fā)乙(yǐ)醇(chún)。
 

　　(3)DNA中有金屬離子(zǐ)殘留。增加70%乙(yǐ)醇洗滌次數。
 

　　三(sān)
，試(shì)劑(jì)盒法(fǎ)(吸附柱(zhù)法)提(tí)取基(jī)因(yīn)組(zǔ)DNA
 

　　(1)DNA鹽(yán)濃(nóng)度(dù)過高：在使(shǐ)用漂洗液(yè)進(jìn)行(háng)清(qīng)洗時(shí)，可沿吸附柱的管(guǎn)壁四周加入(rù)，且(qiě)加入漂洗(xǐ)液後(hòu)室溫靜(jìng)置5min，有助於清(qīng)洗掉吸附(fù)柱(zhù)膜上(shàng)殘留(liú)的鹽(yán)離(lí)子。
 

　　(2)洗(xǐ)脫(tuō)的(dí)DNA中(zhōng)殘(cán)留(liú)乙醇：向(xiàng)吸(xī)附柱中加(jiā)入(rù)洗脫液(yè)前，需室溫(wēn)靜置(zhì)2min，讓殘留(liú)的乙醇揮(huī)發(fā)後(hòu)進(jìn)行(háng)洗(xǐ)脫。
 

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