細胞轉染(rǎn)的影響因(yīn)素
 

　　做(zuò)轉染實(shí)驗時(shí)，除(chú)了(liǎo)選擇(zé)合(hé)適的轉染試(shì)劑(jì)，還需(xū)要對轉(zhuǎn)染條(tiáo)件進行優(yōu)化(huà)，以(yǐ)便獲(huò)得轉(zhuǎn)染(rǎn)效(xiào)果(guǒ)。那麼你知(zhī)道(dào)影響細(xì)胞轉染的因素有哪(nǎ)些嗎
？讓我們一(yī)起來看看(kàn)吧！
 

　　一，細(xì)胞(bāo)狀態(tài)
 

　　細胞狀態不(bù)好，會(huì)導(dǎo)致(zhì)轉染(rǎn)效率低下(xià)，因此，轉染(rǎn)前要(yào)求良好(hǎo)的細(xì)胞狀(zhuàng)態(tài)和(hé)細(xì)胞活(huó)性。轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度以(yǐ)70~90%(貼壁細胞)或2×106~4×106細胞/mL(懸浮細(xì)胞(bāo))為(wéi)宜，一般不(bù)建議用(yòng)生(shēng)長幾天或(huò)傳代次數少的(dí)細(xì)胞做(zuò)轉染，細胞(bāo)密(mì)度(dù)過高會(huì)嚴重影響細(xì)胞(bāo)狀態(tài)(周期進程阻滯(zhì)，凋(diāo)亡增(zēng)加等)，細(xì)胞(bāo)密度過(guò)低可能會(huì)導致生(shēng)長異常或者由於轉(zhuǎn)染試(shì)劑(jì)對細胞(bāo)的(dí)毒性導致細胞死亡(wáng)。
 

　　二，質粒
 

　　為實現高效率(shuài)，低毒(dú)性(xìng)的轉染，應(yīng)使(shǐ)用高質量的(dí)質粒(lì)，結(jié)構(gòu)完整，純(chún)度(dù)高，無(wú)汙染，無(wú)菌(jūn)，無(wú)內毒素。如果(guǒ)質粒不純(chún)，帶少量(liáng)鹽離(lí)子，蛋白(bái)，代謝物汙染等都會(huì)顯著影響(xiǎng)轉(zhuǎn)染(rǎn)復合物(wù)的有(yǒu)效形成；而含有內毒(dú)素的質粒對細胞(bāo)存(cún)在很大的毒(dú)性作(zuò)用(yòng)。另(lìng)外抗生素一(yī)般對(duì)真(zhēn)核細胞無(wú)毒，但(dàn)轉染過程中(zhōng)細(xì)胞通透(tòu)性(xìng)增(zēng)加，使抗生(shēng)素(sù)進入細(xì)胞，從而(ér)降低細(xì)胞活(huó)性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染(rǎn)效率(shuài)低(dī)下(xià)。
 

　　三，載(zǎi)體構(gòu)建(jiàn)
 

　　若質粒(lì)基(jī)因產物對細胞有(yǒu)毒(dú)害(hài)作用，則轉(zhuǎn)染難以(yǐ)成功。轉染載(zǎi)體(tǐ)的(dí)構(gòu)建(jiàn)選擇可(kě)調控，強(qiáng)度適合的啟動(dòng)子(zǐ)很重(zhòng)要，可(kě)以(yǐ)用(yòng)空(kōng)載體或相(xiāng)同載體的(dí)其他基因作(zuò)為(wéi)對照排除(chú)毒(dú)性對(duì)細胞(bāo)的(dí)影響。
 

　　四，轉染(rǎn)試劑和DNA的(dí)比例
 

　　許(xǔ)多(duō)轉染(rǎn)方(fāng)法(fǎ)都需(xū)要(yào)優化(huà)轉(zhuǎn)染(rǎn)試劑和DNA的(dí)比例。不同(tóng)細(xì)胞係(xì)轉(zhuǎn)染(rǎn)效率通常不(bù)同，細胞係的選擇(zé)通(tōng)常(cháng)根據(jù)實驗(yàn)需(xū)要確(què)定，轉染(rǎn)試(shì)劑也應根(gēn)據實(shí)驗要求和(hé)細胞特性選擇合適(shì)的，然(rán)後(hòu)進行(háng)預實驗(yàn)，選擇合(hé)適(shì)濃度的DNA，調整(zhěng)DNA與轉染試(shì)劑(jì)的比(bǐ)例，以獲得(dé)較高的轉染效率(shuài)。
 

　　五，轉(zhuǎn)染(rǎn)後(hòu)篩(shāi)選時(shí)間
 

　　轉染(rǎn)後(hòu)篩選(xuǎn)不能(néng)太早或(huò)太晚，因為轉染(rǎn)了(liǎo)外(wài)源(yuán)基(jī)因的(dí)細(xì)胞(bāo)代謝(xiè)負(fù)荷(hé)大，增殖較慢(màn)，太(tài)晚可(kě)能會被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細胞淹沒，導(dǎo)致(zhì)篩選不出(chū)陽(yáng)性克隆。因此一般是在轉染48h之後(hòu)開(kāi)始(shǐ)加抗生素(sù)篩選(xuǎn)。
 

　　六(liù)，汙(wū)染(rǎn)
 

　　細胞(bāo)汙染(rǎn)會(huì)造成(chéng)轉染(rǎn)效率(shuài)低(dī)下，為(wéi)防止(zhǐ)細(xì)胞汙染應注意(yì)避免培養物被細(xì)菌(jūn)，真菌，病(bìng)毒，支原體(tǐ)或其(qí)他細胞種類等汙(wū)染(rǎn)；避免(miǎn)培(péi)養(yǎng)的(dí)細(xì)胞被支原體汙染，必要時進(jìn)行支原(yuán)體汙(wū)染的常規(guī)篩(shāi)查；避免(miǎn)與實(shí)驗室同(tóng)時培(péi)養的其他種類(lèi)細胞發(fā)生交叉(chā)汙染(rǎn)。
 

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