微生(shēng)物汙(wū)染會(huì)對(duì)體外(wài)培(péi)養細胞(bāo)的(dí)正常(cháng)生(shēng)存，生長(cháng)及(jí)功能活(huó)動(dòng)造成極大(dà)幹(gān)擾(rǎo)，嚴(yán)重的可致(zhì)細胞(bāo)死(sǐ)亡(wáng)
。同時，實驗(yàn)結果的準確(què)性(xìng)和可靠(kào)性也大(dà)打折(zhē)扣(kòu)
。所以，保持(chí)細胞(bāo)生存環境(jìng)無(wú)微生(shēng)物汙染是(shì)體(tǐ)外(wài)實(shí)驗(yàn)的前提條件
。良好(hǎo)的無(wú)菌(jūn)操(cāo)作(zuò)可(kě)大大降低細胞(bāo)培(péi)養中的微生物汙染風險(xiǎn)
。那麼你(nǐ)知(zhī)道什麼是支原體汙染嗎？讓(ràng)我們一(yī)起(qǐ)來看看吧
！
 

　　支原體是(shì)介(jiè)於細(xì)菌和病毒之間(jiān)能獨(dú)立生活(huó)的(dí)最(zuì)小(xiǎo)微生(shēng)物，無細胞壁，形(xíng)態(tài)多變，大小介於0.2 ~ 2 μm之間，多吸附在(zài)細胞(bāo)表麵或散在(zài)於(yú)細(xì)胞(bāo)之(zhī)間(jiān)
。不同支(zhī)原體(tǐ)的生(shēng)物學性(xìng)狀有很大(dà)差別(bié)，一(yī)般(bān)對(duì)熱敏感(gǎn)，對(duì)青(qīng)黴(méi)素普遍(biàn)有抗藥(yào)性
。由於支原體無致(zhì)死(sǐ)細胞毒性且(qiě)可(kě)與細胞(bāo)長期(qī)共存，故培養基一般不發(fā)生渾濁(zhuó)，無明顯變(biàn)化，或有微細變化卻由於傳代(dài)和換液而(ér)被緩解
。除(chú)了(liǎo)細胞(bāo)培養狀況不(bù)佳，采(cǎi)用常規顯(xiǎn)微鏡並(bìng)不容(róng)易(yì)觀(guān)察(chá)支原(yuán)體(tǐ)汙染，其(qí)檢出(chū)需借助熒(yíng)光(guāng)染(rǎn)色(sè)，PCR，ELISA，免疫染色(sè)，放射自顯影術(shù)，微(wēi)生(shēng)物學(xué)分析(xī)等(děng)方法，其中(zhōng)采(cǎi)用核酸熒(yíng)光染料進行(háng)DNA染色是相對(duì)簡單和(hé)可信(xìn)的方(fāng)法之一(yī)
。
 

　　當進(jìn)行(háng)熒光染色時，在40×或100×物鏡(jìng)下支(zhī)原(yuán)體可被(bèi)顯(xiǎn)示(shì)為細(xì)胞(bāo)質上明確的(dí)微粒(lì)或(huò)絲(sī)狀(zhuàng)染色，一般(bān)大(dà)小，性質一致，此時同(tóng)樣被亮染的培養細(xì)胞(bāo)的細胞核(hé)可(kě)作為陽性(xìng)對照(zhào)
。確定是(shì)否存(cún)在支原(yuán)體汙(wū)染需(xū)盡可能(néng)多(duō)地(dì)觀察(chá)染(rǎn)色樣(yàng)本，因為不是(shì)所有培養的細胞都(dū)會被(bèi)汙染
。
 

　　用(yòng)熒(yíng)光染(rǎn)色(sè)法進(jìn)行支原(yuán)體檢測時，培(péi)養物的細胞碎片(piàn)可(kě)能(néng)會造(zào)成(chéng)假陽(yáng)性結(jié)果(guǒ)，但細(xì)胞碎(suì)片不會出(chū)現清(qīng)晰的點(diǎn)狀或絲狀支(zhī)原體形態
。若仍不能確認，可吸取(qǔ)適量(liáng)待檢(jiǎn)培養(yǎng)基(jī)與指示細(xì)胞(bāo)(為已(yǐ)明(míng)確(què)無支原(yuán)體(tǐ)汙(wū)染且(qiě)是支(zhī)原(yuán)體的適宜(yí)宿主，同時生(shēng)長良(liáng)好(hǎo)，有(yǒu)足夠的(dí)細胞質(zhì)以顯示粘附(fù)的(dí)支(zhī)原體，如MDCK細胞(bāo))共(gòng)培(péi)養(yǎng)，然後熒光染色(sè)來觀(guān)察指(zhǐ)示(shì)細胞表(biǎo)麵(miàn)是否有支(zhī)原(yuán)體(tǐ)，從而避(bì)免誤(wù)判(pàn)
。
 

　　運用(yòng)熒(yíng)光染色法(fǎ)有(yǒu)時會(huì)觀察到細胞質存在均(jūn)匀亮染，這可能是由(yóu)RNA引(yǐn)起(qǐ)的，這(zhè)類熒光(guāng)會逐(zhú)漸(jiàn)變暗，可(kě)將染(rǎn)色樣本(běn)幹燥避(bì)光保(bǎo)存後(hòu)在(zài)第2天觀察
。如果(guǒ)對(duì)熒光(guāng)檢測的結果(guǒ)存(cún)在懷(huái)疑(yí)，可(kě)重(zhòng)復檢測或(huò)采(cǎi)用其(qí)他方法再次檢(jiǎn)測
。
 

　　支(zhī)原(yuán)體可(kě)黏(nián)附在宿主細胞(bāo)表麵，從細胞膜獲取脂(zhī)質(zhì)和膽(dǎn)固(gù)醇(chún)，造成細胞(bāo)膜損傷
。支(zhī)原體能抑(yì)製細(xì)胞(bāo)代謝和(hé)生長(cháng)，改變(biàn)核(hé)酸合成，影響細胞抗原(yuán)性，導(dǎo)致(zhì)染(rǎn)色體畸(jī)變，幹擾(rǎo)病(bìng)毒復製以及(jí)具有類似病(bìng)毒的作用
。不(bù)同細胞對支原體的感受性(xìng)和反應(yīng)存(cún)在差異
。
 

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