引物(wù)是(shì)一種短的DNA或RNA序列
，用於在(zài)PCR(聚(jù)合酶鏈(liàn)式反(fǎn)應)和其他(tā)分子(zǐ)生(shēng)物學(xué)技術中(zhōng)擴(kuò)增(zēng)和檢測特定的(dí)DNA或RNA序列(liè)。那麼你知道(dào)引物的純化方式有哪些(xiē)嗎？讓(ràng)我(wǒ)們(mén)一起(qǐ)來(lái)看看(kàn)吧(bā)！
 

　　引(yǐn)物(wù)常用的純化方式脫(tuō)鹽
，BioRP / OPC純(chún)化
，PAGE純(chún)化
，HPLC純(chún)化。根(gēn)據實(shí)驗(yàn)需(xū)要
，確定訂購引物的純度級別。
 

　　一
，脫鹽
 

　　寡核苷(gān)酸合(hé)成(chéng)後
，為了純(chún)化(huà)寡(guǎ)核(hé)苷(gān)酸(suān)成為(wéi)天然的(dí)DNA結(jié)構(gòu)
，首先必須(xū)去除保護基(jī)團(tuán)。通過濃(nóng)氨水(shuǐ)處理
，合成(chéng)的(dí)寡核(hé)苷(gān)酸(suān)從固相(xiāng)載體(tǐ)上分離(lí)
，2-氰乙(yǐ)氧(yǎng)基--磷酸二脂(zhī)鍵的保(bǎo)護(hù)基團(tuán)
，以及鹼(jiǎn)基(jī)的(dí)保護基團基(jī)(苯甲酰基和(hé)異(yì)丁基)被去除
，從而形成(chéng)了(liǎo)天(tiān)然的(dí)DNA結構。
 

　　然(rán)而
，必要的(dí)去(qù)保(bǎo)護步驟完成後
，寡核苷(gān)酸(suān)混合物(wù)還(huán)包含幾種必須被去除(chú)的小(xiǎo)分子有(yǒu)機化合(hé)物(wù)。所有(yǒu)非必須有(yǒu)機(jī)化(huà)合物被(bèi)移(yí)除(chú)的過程通(tōng)常叫做(zuò)脫鹽(yán)。脫鹽(yán)純(chún)化(huà)可以借助反(fǎn)向(xiàng)矽膠(jiāo)柱進(jìn)行(háng)。盡管脫鹽(yán)純化可以移(yí)除所(suǒ)有的非(fēi)必須(xū)有機雜質(zhì)
，但(dàn)它不能(néng)有(yǒu)效移除(chú)合(hé)成(chéng)中產(chǎn)生微量(liáng)的(dí)提前終止(zhǐ)的寡核(hé)苷(gān)酸雜鏈(liàn)。然而
，脫鹽的(dí)寡核苷酸還是(shì)能夠滿足(zú)PCR檢測(cè)等(děng)基礎生物研究。
 

　　二
，BioRP / OPC純化
 

　　如(rú)果寡(guǎ)核(hé)苷(gān)酸以“三苯(běn)甲(jiǎ)基”的(dí)形(xíng)式(shì)合(hé)成
，則N-甲基(jī)寡核(hé)苷(gān)酸包含(hán)5’-DMT基團(tuán)
，提前(qián)終(zhōng)止的(dí)寡(guǎ)核苷酸不(bù)包含該基(jī)團。因為DMT基有強的(dí)親(qīn)脂的特(tè)性
，有5’-DMT基團(tuán)的寡(guǎ)核苷酸與(yǔ)反相(xiāng)樹脂有(yǒu)親(qīn)和性
，因此(cǐ)反(fǎn)相親和(hé)樹(shù)脂(zhī)通(tōng)常被用於寡(guǎ)核(hé)苷酸(suān)的純(chún)化。
 

　　利用(yòng)反向樹脂和5’-DMT寡核(hé)苷酸存(cún)在(zài)強親(qīn)和力
，但是提前(qián)終止(zhǐ)的(dí)寡核(hé)苷(gān)酸(suān)不(bù)包(bāo)含DMT基團(tuán)
，所(suǒ)以(yǐ)
，我們能夠成(chéng)功(gōng)的(dí)把(bǎ)想要的N-甲基(jī)寡(guǎ)核苷酸(suān)從提前終止的寡(guǎ)核苷酸(suān)雜質中分離出(chū)來。
 

　　三
，HPLC
 

　　如果合成(chéng)的寡核(hé)苷酸應(yīng)用於克隆
，定(dìng)向(xiàng)誘(yòu)變(biàn)或(huò)定量(liáng)的(dí)基因探(tàn)測
，那麼對(duì)其純(chún)度要求較高。脫鹽或OPC純(chún)化(huà)的寡(guǎ)核苷酸可能(néng)達(dá)不(bù)到要(yào)求
，則HPLC純(chún)化被(bèi)廣泛(fàn)地用(yòng)於(yú)這(zhè)個目的。作(zuò)為(wéi)一(yī)種純(chún)化樹(shù)脂
，陰(yīn)離(lí)子(zǐ)交換(huàn)樹(shù)脂(zhī)或(huò)反(fǎn)向樹(shù)脂被用(yòng)於寡核(hé)苷(gān)酸純化。陰離子交換樹(shù)脂(zhī)的HPLC通(tōng)常顯示(shì)95-98%純化效率(shuài)
，對(duì)於達到35-mer寡(guǎ)核苷(gān)酸的純化(huà)是充分(fēn)的。
 

　　反向樹脂化(huà)的(dí)HPLC與(yǔ)陰離(lí)子交換樹脂的(dí)HPLC呈(chéng)現相(xiāng)似(sì)的(dí)純化(huà)效率。因(yīn)為HPLC的(dí)純化(huà)效率(shuài)很大程(chéng)度依靠寡核苷酸的長度
，用HPLC法不能(néng)有效純化長的寡核苷酸(大(dà)於35-mer)。
 

　　四
，PAGE
 

　　對(duì)於長的寡核苷酸的純(chún)化(50-100mer)
，推(tuī)薦(jiàn)使用(yòng)PAGE純(chún)化法(fǎ)
，它使用(yòng)交連的聚丙(bǐng)烯酰胺凝膠(jiāo)(電泳)作為(wéi)純化(huà)基(jī)質。盡(jìn)管(guǎn)PAGE顯(xiǎn)示出高的純化(huà)效率(>98%)
，但它在(zài)額(é)外(wài)的(dí)步驟方(fāng)麵(miàn)有一些缺陷
，比如在(zài)PAGE之(zhī)後(hòu)需要提取(qǔ)和脫鹽(yán)
，繼而(ér)將導致(zhì)純(chún)化產率的下降。
 

　　更(gēng)多有關引物的(dí)純化方式(shì)
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