產品名稱(chēng)：Elabscience大(dà)鼠(shǔ)VEGF-A ELISA試劑盒(hé)(E-EL-R2603)現貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨(huò)號：E-EL-R2603

產(chǎn)品品牌：Elabscience

產品用途：該試劑盒用於體外定量(liáng)檢(jiǎn)測大鼠血清，血漿(jiāng)或其它(tā)相關生(shēng)物液體中VEGF-A濃度(dù)。

檢測原理：本(běn)試劑(jì)盒(hé)采用(yòng)雙抗體(tǐ)夾心 ELISA 法(fǎ)。用抗(kàng)大(dà)鼠 VEGF-A 抗(kàng)體包(bāo)被(bèi)於酶標(biāo)板上(shàng)，實(shí)驗時(shí)樣品(pǐn)（或標(biāo)準品）中(zhōng)的大鼠 VEGF-A 會(huì)與(yǔ)包被(bèi)抗體結合。後依次(cì)加入生(shēng)物(wù)素化的(dí)抗(kàng)大鼠(shǔ) VEGF-A 抗體和(hé)辣根過(guò)氧(yǎng)化物酶標(biāo)記的(dí)親(qīn)和素，抗大鼠 VEGF-A 抗體與結合(hé)在包被(bèi)抗體上的(dí)大(dà)鼠(shǔ) VEGF-A 結合(hé)，生物素與親和素(sù)特異性結合(hé)而形成(chéng)免(miǎn)疫(yì)復(fù)合物，遊離(lí)的成(chéng)分被(bèi)洗去(qù)。加(jiā)入顯色(sè)底(dǐ)物(TMB)，TMB 在(zài)辣(là)根(gēn)過(guò)氧(yǎng)化(huà)物酶的催(cuī)化(huà)下(xià)呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液後變成黃(huáng)色。用酶(méi)標(biāo)儀在 450 nm 波(bō)長(cháng)處測 OD 值(zhí)，VEGF-A 濃(nóng)度(dù)與(yǔ) OD450值之間(jiān)呈正(zhèng)比，通(tōng)過繪(huì)製(zhì)標準曲綫計算出(chū)樣品(pǐn)中 VEGF-A 的(dí)濃度(dù)。

注意事(shì)項：

試劑盒(hé)注(zhù)意事(shì)項：

1) 本試劑盒(hé)僅供體外研究使(shǐ)用，不(bù)用於臨床診(zhěn)斷(duàn)。

2) 試驗(yàn)中請(qǐng)穿著實驗(yàn)服並戴乳膠手套(tào)做(zuò)好(hǎo)防(fáng)護工作(zuò)。特別是檢(jiǎn)測血液(yè)或(huò)者其他體(tǐ)液(yè)樣品(pǐn)時(shí)，請按國(guó)家(jiā)生物試(shì)驗室安(ān)全(quán)防(fáng)護條例(lì)執行。

3) 剛開(kāi)啟(qǐ)的酶(méi)標板孔(kǒng)中可能(néng)會有(yǒu)少(shǎo)許(xǔ)水(shuǐ)樣物質，此(cǐ)為(wéi)正(zhèng)常現象，不會對(duì)實(shí)驗結(jié)果造(zào)成(chéng)任(rèn)何影響。暫時不用的板條(tiáo)應拆卸(xiè)後(hòu)放入備用鋁箔(bó)袋，按照上述表(biǎo)格(gé)中保(bǎo)存(cún)條件(jiàn)存放。

4) 請(qǐng)勿(wù)重復(fù)使(shǐ)用(yòng)已稀(xī)釋過的(dí)標準品，生物(wù)素化(huà)抗體工作(zuò)液(yè)，酶(méi)結(jié)合(hé)物工作(zuò)液(yè)。未(wèi)用完(wán)的濃縮生(shēng)物素(sù)化抗(kàng)體(tǐ)(100×)，濃(nóng)縮(suō)HRP酶(méi)結(jié)合(hé)物(wù)(100×)，酶標板及其(qí)他(tā)原(yuán)液(yè)按(àn)照上(shàng)述(shù)表(biǎo)格中(zhōng)保(bǎo)存(cún)條件存放(fàng)。

5) 檢測(cè)使(shǐ)用的酶標(biāo)儀需(xū)要安(ān)裝能(néng)檢(jiǎn)測(cè)450±2 nm波長的濾光片，光密度範圍在0-3.5之(zhī)間。建(jiàn)議(yì)使用(yòng)時提(tí)前15分鐘(zhōng)預熱。

6) 請(qǐng)勿使(shǐ)用其他(tā)批(pī)號或(huò)其他來(lái)源(yuán)的(dí)試劑混合或替(tì)代(dài)本(běn)試(shì)劑盒中的(dí)試劑。

7) 試(shì)驗中所(suǒ)用(yòng)的(dí)EP管和吸頭(tóu)均為一次性(xìng)使用，嚴(yán)禁混用。

8) 請勿使(shǐ)用(yòng)過(guò)期的(dí)試劑。n

樣品注意事項：

1) 收集血液的(dí)試管應為一次(cì)性無(wú)內毒(dú)素試管(guǎn)。避(bì)免(miǎn)使(shǐ)用(yòng)溶血(xiě)，高血脂樣品。

2) 樣品(pǐn)收(shōu)集後若在1周內(nèi)進行檢測(cè)可保存於2-8℃，若不(bù)能及時檢測，請按一(yī)次(cì)使用量(liáng)分裝，凍存於(yú)-20℃(1個月(yuè)內檢(jiǎn)測)，或-80℃(3個月內檢測(cè))，避免反復凍融(róng)。在(zài)檢(jiǎn)測前，冷凍過的樣本應(yīng)緩(huǎn)慢(màn)地融(róng)化並(bìng)離(lí)心除(chú)去(qù)凍融過(guò)程產(chǎn)生(shēng)的(dí)沉澱物(wù)。室溫(wēn)混匀(yún)後(hòu)使用。

3) 試劑盒檢測範(fàn)圍(wéi)不等同於樣本中待測物的濃度範圍。如(rú)果(guǒ)樣品中待測(cè)物(wù)濃(nóng)度過高(gāo)或過低(dī)，請對樣本做(zuò)適當的(dí)稀釋(shì)或濃縮(suō)。

4) 若(ruò)所(suǒ)檢樣(yàng)本(běn)不在說明(míng)書(shū)所列(liè)樣(yàng)本之中，建議(yì)做(zuò)預(yù)實驗驗(yàn)證(zhèng)其(qí)檢測有(yǒu)效(xiào)性。

5) 若使用(yòng)化學(xué)裂(liè)解液(yè)製備組織(zhī)匀漿或細(xì)胞提(tí)取(qǔ)液(yè)，由於(yú)引(yǐn)入某些化(huà)學物質(zhì)會導致ELISA測(cè)值出(chū)現(xiàn)偏差。

6) 某(mǒu)些重(zhòng)組蛋白可(kě)能與試劑(jì)盒中(zhōng)捕獲(huò)或(huò)檢測(cè)抗(kàng)體(tǐ)不(bù)匹配而(ér)出現(xiàn)不(bù)能(néng)檢(jiǎn)測的情況。

操作(zuò)步驟：

1. 分別設定標準孔，空白孔和(hé)樣(yàng)本(běn)孔。標準孔加入 100 μL倍比(bǐ)稀(xī)釋的標準品，空白孔加(jiā)入 100 μL 標準品&樣(yàng)本稀釋液(yè)，其餘(yú)孔加(jiā)入 100 μL 待測樣本(建(jiàn)議所有(yǒu)的待檢樣(yàng)本和標準品(pǐn)在檢測中(zhōng)設(shè)立(lì)復(fù)孔(kǒng)；建議(yì)通(tōng)過預實(shí)驗(yàn)或(huò)咨詢技(jì)術支(zhī)持(chí)確定待檢樣本(běn)的稀釋倍數)。給酶(méi)標板覆膜，37℃孵(fū)育(yù) 90 分(fēn)鐘。提示：加樣時將(jiāng)樣品加於(yú)酶標板(bǎn)底部(bù)，盡(jìn)量(liáng)不(bù)觸(chù)及(jí)孔壁，輕輕晃動(dòng)混匀，避免(miǎn)產生(shēng)氣(qì)泡(pào)。加樣(yàng)時間(jiān)宜控(kòng)製在 10 分鐘內。

2. 甩盡孔(kǒng)內液體(tǐ)，不用(yòng)洗滌。每個(gè)孔(kǒng)中(zhōng)加(jiā)入生(shēng)物素化(huà)抗(kàng)體(tǐ)工作液 100 μL，酶(méi)標板(bǎn)加上覆(fù)膜(mó)，37℃溫(wēn)育(yù) 1 小時(shí)。

3. 甩盡(jìn)孔內(nèi)液(yè)體，在(zài)潔淨的吸水紙上拍幹(gān)。每孔(kǒng)加(jiā)洗滌(dí)液 350 μL，浸(jìn)泡 1 分鐘，吸(xī)去或甩(shuǎi)掉酶標板內的液(yè)體，拍幹(gān)。重(zhòng)復此洗(xǐ)板步(bù)驟 3 次。提示：此(cǐ)處與其(qí)他洗(xǐ)板(bǎn)步驟都可使用(yòng)洗(xǐ)板(bǎn)機(參(cān)考(kǎo)北京拓普(pǔ) DEM-3 型洗(xǐ)板機(jī)參(cān)數(shù)設置(zhì)：2 點(diǎn)吸(xī)，每孔加(jiā)入(rù)洗(xǐ)滌(dí)液 350 μL，振板(bǎn) 5 秒，吸液 0.5 秒(miǎo))。洗板(bǎn)完(wán)成後請(qǐng)立即(jí)進行(háng)下(xià)步操(cāo)作，不(bù)要讓(ràng)微孔(kǒng)板幹燥。

4. 每(měi)孔(kǒng)加 HRP 酶結合(hé)物工(gōng)作液 100 μL，酶(méi)標(biāo)板加上(shàng)覆膜(mó)，37℃溫育 30 分(fēn)鐘。

5. 甩盡(jìn)孔內(nèi)液體，洗板 5 次，方法同步驟 3。

6. 每(měi)孔(kǒng)加(jiā)底物(wù)溶(róng)液(yè)(TMB)90 μL，酶標(biāo)板(bǎn)加(jiā)上覆(fù)膜(mó)，37℃避光(guāng)孵(fū)育(yù) 15 分鐘(zhōng)左右(yòu)。提示：根(gēn)據實(shí)際顯色情(qíng)況酌情縮短或(huò)延(yán)長，但不可超過 30 分鐘。當(dāng)標準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度(dù)時(前 4 個(gè)顯色孔出現明顯(xiǎn)藍(lán)色(sè)梯度)，即可終(zhōng)止(zhǐ)。提(tí)前(qián) 15 分鐘打(dǎ)開(kāi)酶標儀預熱。

7. 每孔加(jiā)終(zhōng)止(zhǐ)液 50 μL，終止反(fǎn)應(yīng)。提示(shì)：終(zhōng)止液的加入(rù)順(shùn)序(xù)應盡量(liáng)與(yǔ)底物溶(róng)液的(dí)加(jiā)入(rù)順序相同。

8. 立(lì)即用酶(méi)標(biāo)儀在 450 nm 波長(cháng)測(cè)量(liáng)各孔的光(guāng)密度(dù)(OD值(zhí))。

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