產品(pǐn)名稱(chēng)：Elabscience小鼠胰(yí)島素(sù)ELISA試劑盒(hé)(E-EL-M1382)現貨(huò)供應(yīng)

產品貨(huò)號(hào)：E-EL-M1382

產品(pǐn)品(pǐn)牌(pái)：Elabscience

產(chǎn)品用途(tú)：該試(shì)劑盒(hé)用於體外(wài)定量檢(jiǎn)測小(xiǎo)鼠(shǔ)血清(qīng)和(hé)血漿(jiāng)中(zhōng)INS濃度(dù)。

檢測原理(lǐ)：本試(shì)劑(jì)盒采用(yòng)雙(shuāng)抗(kàng)體夾心 ELISA 法(fǎ)。用抗小鼠(shǔ) INS 抗體包被(bèi)於(yú)酶標(biāo)板上(shàng)，實驗(yàn)時樣(yàng)品(pǐn)（或(huò)標(biāo)準品）中(zhōng)的(dí)小(xiǎo)鼠 INS 會與包被(bèi)抗(kàng)體(tǐ)結合(hé)。後依(yī)次加入(rù)生物(wù)素化的抗小鼠(shǔ) INS 抗(kàng)體(tǐ)和(hé)辣根過氧化(huà)物酶(méi)標記(jì)的親和素，抗(kàng)小鼠 INS 抗體與結合在包被抗(kàng)體上(shàng)的小鼠 INS 結(jié)合(hé)，生物素與(yǔ)親和素特(tè)異性結合(hé)而形成(chéng)免(miǎn)疫(yì)復合物(wù)，遊離的(dí)成(chéng)分被洗去(qù)。加入顯(xiǎn)色底物(TMB)，TMB 在(zài)辣根(gēn)過(guò)氧(yǎng)化(huà)物(wù)酶的催化(huà)下呈(chéng)現(xiàn)藍(lán)色，加終(zhōng)止(zhǐ)液(yè)後變(biàn)成黃(huáng)色。用酶(méi)標(biāo)儀(yí)在 450 nm 波長處測(cè) OD 值(zhí)，INS 濃度與(yǔ) OD450 值(zhí)之間呈(chéng)正比，通(tōng)過(guò)繪製(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲(qū)綫計算(suàn)出樣(yàng)品(pǐn)中 INS 的(dí)濃度。

注意事(shì)項：

試劑(jì)盒注(zhù)意事項(xiàng)：

1) 本(běn)試劑(jì)盒僅供體外研究使用(yòng)，不用於臨(lín)床(chuáng)診斷。

2) 試(shì)驗中請穿著實驗服(fú)並(bìng)戴乳膠(jiāo)手套做(zuò)好(hǎo)防(fáng)護工作(zuò)。特(tè)別是(shì)檢測(cè)血液或者其(qí)他體液樣品時，請按(àn)國(guó)家(jiā)生物(wù)試驗(yàn)室安全(quán)防護條(tiáo)例執行(háng)。

3) 剛開啟(qǐ)的酶標(biāo)板(bǎn)孔中(zhōng)可能會有少(shǎo)許水樣物(wù)質，此(cǐ)為正常(cháng)現(xiàn)象(xiàng)，不(bù)會對實(shí)驗結果造(zào)成(chéng)任何(hé)影響。暫時不用(yòng)的板(bǎn)條(tiáo)應(yīng)拆卸後放(fàng)入備用鋁箔(bó)袋，按(àn)照(zhào)上述(shù)表格中保(bǎo)存條(tiáo)件存放。

4) 請勿(wù)重復(fù)使用(yòng)已稀釋過的標準(zhǔn)品
，生物(wù)素化(huà)抗體(tǐ)工作液
，酶結合(hé)物(wù)工作液。未(wèi)用完的(dí)濃(nóng)縮(suō)生(shēng)物(wù)素化抗體(100×)
，濃縮(suō)HRP酶結(jié)合物(wù)(100×)
，酶(méi)標板(bǎn)及其(qí)他原液按(àn)照(zhào)上(shàng)述表格(gé)中保存(cún)條件存放(fàng)。

5) 檢(jiǎn)測使(shǐ)用(yòng)的酶標儀(yí)需要(yào)安(ān)裝(zhuāng)能檢測450±2 nm波(bō)長(cháng)的濾光(guāng)片(piàn)，光(guāng)密度範圍(wéi)在0-3.5之間(jiān)。建(jiàn)議使用時提前(qián)15分(fēn)鐘預熱(rè)。

6) 請(qǐng)勿使用(yòng)其他批(pī)號或其他來源的試劑(jì)混(hùn)合(hé)或替代本(běn)試(shì)劑盒(hé)中的試(shì)劑(jì)。

7) 試驗中所用的(dí)EP管和吸頭(tóu)均(jūn)為(wéi)一(yī)次性使用，嚴(yán)禁混用(yòng)。

8) 請(qǐng)勿(wù)使(shǐ)用過期(qī)的(dí)試(shì)劑。n

樣品(pǐn)注(zhù)意事項：

1) 收(shōu)集血液的(dí)試管(guǎn)應為一(yī)次(cì)性無內毒素(sù)試管。避免使用(yòng)溶血(xiě)，高(gāo)血脂(zhī)樣品(pǐn)。

2) 樣(yàng)品收集(jí)後(hòu)若(ruò)在(zài)1周(zhōu)內進行檢(jiǎn)測可保(bǎo)存(cún)於2-8℃，若不能(néng)及(jí)時(shí)檢(jiǎn)測(cè)，請(qǐng)按一次(cì)使用(yòng)量分裝(zhuāng)，凍存於-20℃(1個月內檢測(cè))，或(huò)-80℃(3個月(yuè)內檢(jiǎn)測)，避免反(fǎn)復凍(dòng)融。在(zài)檢測前，冷(lěng)凍過的(dí)樣(yàng)本(běn)應緩(huǎn)慢地(dì)融化並離心除去凍融過(guò)程(chéng)產(chǎn)生的(dí)沉澱(diàn)物。室(shì)溫混匀(yún)後(hòu)使用。

3) 試(shì)劑盒(hé)檢測範(fàn)圍不等同於(yú)樣(yàng)本(běn)中待測(cè)物的(dí)濃度範(fàn)圍(wéi)。如果樣品中(zhōng)待測物濃度過(guò)高或過低(dī)，請對樣(yàng)本做(zuò)適當(dāng)的稀釋或濃(nóng)縮。

4) 若所(suǒ)檢(jiǎn)樣(yàng)本不在(zài)說(shuō)明(míng)書所(suǒ)列(liè)樣本之中(zhōng)，建議做(zuò)預實驗驗證(zhèng)其(qí)檢(jiǎn)測有效(xiào)性(xìng)。若使用化學(xué)裂解液製(zhì)備組(zǔ)織匀漿或細胞(bāo)提(tí)取液，由於引入某些化學(xué)物質會(huì)導(dǎo)致ELISA測值出(chū)現偏(piān)差(chà)。

5) 某些(xiē)重組蛋白可(kě)能(néng)與試(shì)劑盒中捕(bǔ)獲或檢測抗體(tǐ)不匹(pǐ)配而(ér)出現不能檢測的情況(kuàng)。

操(cāo)作步驟：

1. 分別設(shè)定標準孔
，空(kōng)白(bái)孔和樣本孔(kǒng)。標準孔加入 100 μL倍比稀(xī)釋(shì)的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品，空(kōng)白(bái)孔加入 100 μL 標準品(pǐn)&樣本稀(xī)釋(shì)液，其餘孔加入 100 μL 待測樣(yàng)本(建(jiàn)議所有的(dí)待(dài)檢(jiǎn)樣本(běn)和(hé)標(biāo)準品在(zài)檢測中設(shè)立復(fù)孔(kǒng)；建議通過預實驗(yàn)或咨(zī)詢技術(shù)支持確定(dìng)待檢樣(yàng)本(běn)的(dí)稀釋倍數)。給(gěi)酶標板覆膜(mó)，37℃孵育 90 分(fēn)鐘。提(tí)示：加(jiā)樣(yàng)時將樣(yàng)品加於(yú)酶(méi)標板底部，盡(jìn)量(liáng)不觸及(jí)孔壁，輕(qīng)輕晃(huǎng)動(dòng)混匀，避免(miǎn)產生氣(qì)泡。加(jiā)樣時(shí)間宜控製在(zài) 10 分(fēn)鐘內。

2. 甩盡(jìn)孔內(nèi)液(yè)體(tǐ)，不用洗(xǐ)滌(dí)。每個孔中(zhōng)加入生物素(sù)化抗體工作液 100 μL，酶(méi)標(biāo)板(bǎn)加(jiā)上(shàng)覆(fù)膜，37℃溫(wēn)育(yù) 1 小(xiǎo)時(shí)。

3. 甩盡孔(kǒng)內液體(tǐ)，在潔(jié)淨(jìng)的(dí)吸(xī)水紙上拍幹。每(měi)孔加(jiā)洗滌(dí)液(yè) 350 μL，浸(jìn)泡 1 分鐘(zhōng)，吸去或甩掉酶(méi)標板(bǎn)內的(dí)液體(tǐ)，拍(pāi)幹。重(zhòng)復(fù)此(cǐ)洗(xǐ)板步驟(zhòu) 3 次。提(tí)示：此處(chǔ)與其(qí)他洗(xǐ)板步驟(zhòu)都可使用(yòng)洗板機(參(cān)考北(běi)京拓(tuò)普 DEM-3 型(xíng)洗(xǐ)板機(jī)參數設(shè)置(zhì)：2 點吸，每孔加(jiā)入(rù)洗滌(dí)液 350 μL，振板 5 秒，吸液(yè) 0.5 秒)。洗(xǐ)板完成(chéng)後請(qǐng)立即進(jìn)行(háng)下(xià)步操作，不要讓微孔板幹(gān)燥。

4. 每(měi)孔(kǒng)加 HRP 酶結合物工作液 100 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫(wēn)育(yù) 30 分鐘。

5. 甩盡(jìn)孔(kǒng)內(nèi)液體(tǐ)，洗板 5 次，方(fāng)法同步驟(zhòu) 3。

6. 每孔(kǒng)加底物溶液(TMB)90 μL，酶標(biāo)板加(jiā)上(shàng)覆膜，37℃避(bì)光(guāng)孵育 15 分鐘(zhōng)左右(yòu)。提(tí)示(shì)：根據實(shí)際(jì)顯(xiǎn)色(sè)情況(kuàng)酌情(qíng)縮(suō)短或延長(cháng)，但(dàn)不可超過 30 分鐘(zhōng)。當標準孔(kǒng)出(chū)現明(míng)顯梯(tī)度時(shí)(前(qián) 4 個顯色(sè)孔出現明(míng)顯藍色(sè)梯(tī)度)，即(jí)可終止。提前(qián) 15 分(fēn)鐘打(dǎ)開酶(méi)標儀預熱。

7. 每孔(kǒng)加終止(zhǐ)液 50 μL，終(zhōng)止反(fǎn)應(yīng)。提示(shì)：終(zhōng)止(zhǐ)液的加入(rù)順(shùn)序應(yīng)盡量與(yǔ)底物(wù)溶液(yè)的加(jiā)入順(shùn)序相同(tóng)。

8. 立(lì)即用酶標(biāo)儀在 450 nm 波(bō)長測(cè)量各孔的(dí)光密度(dù)(OD值)。

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