一(yī)，DH5α

DH5α是(shì)大腸杆(gān)菌(jūn)(Escherichia coli)的(dí)一(yī)種感受態細胞係，通常被(bèi)用(yòng)於(yú)分子生物學實驗(yàn)中。這些細胞(bāo)被設計(jì)成對(duì)外(wài)源(yuán)DNA接(jiē)受(shòu)性較(jiào)高，因此在(zài)分子(zǐ)克(kè)隆(lóng)，DNA轉化和質粒擴增(zēng)等實驗中(zhōng)被廣泛使用(yòng)。DH5α感(gǎn)受態細(xì)胞對(duì)於吸收(shōu)外源DNA特(tè)別有效(xiào)，這(zhè)使(shǐ)得它(tā)們在基因(yīn)工(gōng)程(chéng)和(hé)分(fēn)子生物學(xué)研(yán)究中成(chéng)為常見的實驗(yàn)室(shì)工(gōng)具(jù)。

二，操作步驟(zhòu)

1，前夜(yè)接種受體菌(jūn)（DH5a或DH10B），挑取單(dān)菌落於LB培(péi)養基(jī)中37℃搖床(chuáng)培養(yǎng)過夜（約16小(xiǎo)時）；

2，取(qǔ)1ml過(guò)夜(yè)培(péi)養物轉接於(yú)100ml LB培(péi)養(yǎng)基(jī)中(zhōng)，在(zài)37℃搖床(chuáng)上劇烈(liè)振蕩(dàng)培養約2.5-3小(xiǎo)時（250-300rpm）；

3，將(jiāng)0.1M CaCl2溶液置(zhì)於冰上(shàng)預冷(lěng)；以(yǐ)下步驟需(xū)在超(chāo)淨工(gōng)作(zuò)台和冰(bīng)上操(cāo)作；

4，吸(xī)取1.5ml培養(yǎng)好的(dí)菌(jūn)液(yè)至(zhì)1.5ml離心管(guǎn)中(zhōng)，在(zài)冰上冷卻(què)10分(fēn)鐘(zhōng)；

5，4℃下(xià)3000 g冷(lěng)凍離(lí)心(xīn)5分鐘；

6，棄去(qù)上清，加入100微升預冷0.1M CaCl2溶液，用移液(yè)槍輕輕上下吸動打匀(yún)，使(shǐ)細胞重(zhòng)新懸浮，在冰放(fàng)置20分鐘；

7 ，4℃下(xià)3000 g冷(lěng)凍離心5分鐘(zhōng)；

8 ，棄(qì)去(qù)上(shàng)清(qīng)，加入100微(wēi)升預冷0.1M CaCl2溶(róng)液，用移液槍輕(qīng)輕(qīng)上下(xià)吸(xī)動打匀，使(shǐ)細胞重新懸(xuán)浮(fú)；

9 ，細胞(bāo)懸(xuán)浮液可(kě)立即(jí)用於(yú)轉(zhuǎn)化實驗或添加冷(lěng)凍(dòng)保護劑（15% - 20%甘(gān)油）後(hòu)超(chāo)低溫冷(lěng)凍貯(zhù)存備(bèi)用(yòng)（－70℃）。

三(sān)，大(dà)腸杆(gān)菌檢(jiǎn)測(cè)試劑盒推薦

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