WB 是進(jìn)行(háng)蛋(dàn)白(bái)質分析流(liú)行(háng)和成(chéng)熟(shú)的技術之一，全(quán)稱(chēng)為(wéi)蛋白(bái)質(zhì)免疫印跡，那麼你(nǐ)知(zhī)道(dào)WB實(shí)驗的基本(běn)原理是什麼(mó)嗎？讓(ràng)我們一起來看(kàn)看吧(bā)！
 

　　WB的由(yóu)來
 

　　1975年，英國(guó)人Edwin Mellor Southern發明了(liǎo)基因組DNA特(tè)定序列(liè)定位的方(fāng)法：
 

　　將待測定(dìng)DNA分子(zǐ)從(cóng)瓊脂糖凝(níng)膠中(zhōng)轉移(yí)到一定的固相(xiāng)支(zhī)持物硝酸(suān)纖維(wéi)素(sù)膜(mó)(NC膜)上(shàng)，即(jí)印(yìn)跡(blotting)，然(rán)後(hòu)膜上(shàng)的核(hé)酸與同位素標(biāo)記的探針(zhēn)在一定的溫度(dù)和離子(zǐ)強度下雜交(jiāo)，檢測特定DNA片段(duàn)，並(bìng)將這(zhè)種方(fāng)法(fǎ)命名為Southern印跡(jì)法；後(hòu)來Alwine又(yòu)用類似方法(fǎ)檢測RNA，正好與DNA相對(duì)應，故被稱(chēng)為Northern印跡(jì)雜(zá)交；1981年(nián)Burette成功(gōng)將對單向電(diàn)泳分離後的蛋白質(zhì)分(fēn)子轉印到(dào)膜上並(bìng)進(jìn)行(háng)免(miǎn)疫(yì)學分(fēn)析(xī)(如抗(kàng)體抗原特異(yì)性(xìng)結(jié)合)，這種(zhǒng)印(yìn)跡分析(xī)稱為Western印跡法(fǎ)；而Eastern blotting是Western blotting的變形，隻(zhī)是檢(jiǎn)測對象變成(chéng)了雙向(xiàng)電泳(yǒng)後(hòu)的蛋(dàn)白質分子(所謂的(dí)雙(shuāng)向電(diàn)泳(yǒng)是等(děng)電(diàn)聚焦(jiāo)-聚丙烯酰胺(àn)凝(níng)膠電(diàn)泳(yǒng)(IEF-PAGE)分(fēn)離(lí)蛋白質)。
 

　　WB實驗是通過聚(jù)丙烯酰胺(àn)凝膠電泳(PAGE)將(jiāng)混(hùn)合蛋白(bái)質樣品分離後，利用特(tè)殊(shū)虹(hóng)吸(xī)或(huò)電(diàn)場裝置印(yìn)跡至(zhì)與相對應的(dí)第一(yī)抗體(tǐ)特(tè)異性結(jié)合，之(zhī)後再與(yǔ)酶(méi)或同(tóng)位(wèi)素(sù)標(biāo)記(jì)的(dí)第(dì)二抗(kàng)體相(xiāng)結(jié)合(hé)，最(zuì)終通過(guò)底物(wù)顯(xiǎn)色或放射自(zì)顯影來檢測(cè)特(tè)異(yì)性目(mù)的(dí)基(jī)因表達的蛋(dàn)白成(chéng)分。Western Blotting先(xiān)使(shǐ)用PAGE(聚(jù)丙烯(xī)酰(xiān)胺(àn)凝膠(jiāo)電(diàn)泳(yǒng))電(diàn)泳(yǒng)分(fēn)離(lí)出(chū)待(dài)檢測的(dí)蛋(dàn)白質(zhì)，再(zài)用(yòng)電場裝置(zhì)印(yìn)跡至固(gù)相介(jiè)質(如PVDF膜)上(shàng)，固相介質以非共價鍵形(xíng)式吸附(fù)蛋白(bái)質，且能(néng)保(bǎo)持電(diàn)泳分(fēn)離(lí)的多肽(tài)類型(xíng)及生物學活(huó)性(xìng)不變(biàn)。再(zài)以膜上(shàng)的蛋白質片段(duàn)作為抗(kàng)原(yuán)，與(yǔ)一抗(“探(tàn)針(zhēn)”)特(tè)異(yì)性結(jié)合起(qǐ)免(miǎn)疫反(fǎn)應，再與酶或同位(wèi)素(sù)標記(jì)標(biāo)記(jì)的(dí)二抗(kàng)結合(hé)，經(jīng)過底物顯色或放射自(zì)顯影以(yǐ)檢(jiǎn)測電泳分(fēn)離的特(tè)異(yì)性目的基因(yīn)表達的(dí)蛋(dàn)白(bái)成分(fēn)。
 

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