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當前位置(zhì):首頁(yè)技(jì)術文章(zhāng)
  • 病毒(dú)轉染(rǎn)實驗有何注意(yì)事(shì)項(xiàng)?

    2023-09-14 病毒轉染是指將(jiāng)外源病(bìng)毒導入真(zhēn)核細胞的技(jì)術(shù),用病(bìng)毒將(jiāng)帶(dài)有(yǒu)目(mù)的(dí)基(jī)因的載體(tǐ)整(zhěng)合到細胞(bāo)的基因組中(zhōng),以達到長(cháng)期(qī)穩定表達目(mù)的基(jī)因的目(mù)的。隨(suí)著分子(zǐ)生物學(xué)和細胞生(shēng)物(wù)學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉染(rǎn)已(yǐ)經(jīng)成為(wéi)研究(jiū)和控(kòng)製真核(hé)細胞(bāo)基因功能的常(cháng)規(guī)工具。那麼病毒(dú)轉(zhuǎn)染實驗有何注意事項呢?讓我(wǒ)們一起來看(kàn)看吧!一(yī),病毒(dú)安全性問題(tí)病毒(dú)本(běn)身(shēn)具(jù)有(yǒu)一定(dìng)的(dí)危險性(xìng),需要在符(fú)合生物(wù)安全(quán)實(shí)驗室標準的條件下進行(háng)實(shí)驗,並(bìng)遵守相關(guān)的(dí)實驗室(shì)安全操(cāo)作規範。病(bìng)毒(dú)操作時(shí)最好使(shǐ)用(yòng)生物安(ān)全(quán)櫃。如(rú)果(guǒ)使(shǐ)用(yòng)普(pǔ)通超淨工作台(tái)操(cāo)作(zuò)病毒,請不要(yào)打開(kāi)排風扇。病毒(dú)操作(zuò)時...
  • 如何(hé)提(tí)高(gāo)電(diàn)轉(zhuǎn)效(xiào)率(shuài)?

    2023-09-14 電轉(zhuǎn),也(yě)稱電(diàn)穿(chuān)孔法,是(shì)通過脈衝電(diàn)流在細胞(bāo)膜上(shàng)打孔,將外(wài)源(yuán)分子(zǐ)(DNA,RNA,mRNA等)導入(rù)真核細(xì)胞內(nèi),來(lái)改變(biàn)細(xì)胞的特性(xìng),從(cóng)而達到(dào)改(gǎi)造細胞(bāo)的目(mù)的(dí),是(shì)實(shí)現細胞(bāo)基(jī)因(yīn)功(gōng)能和(hé)蛋白質表(biǎo)達研(yán)究的(dí)重要工具。那(nà)麼該(gāi)如(rú)何(hé)提高電(diàn)轉(zhuǎn)效率呢(ní)?讓(ràng)我(wǒ)們一起來看看吧(bā)!一,細胞(bāo)收集時(shí):1)在(zài)消(xiāo)化(huà)貼壁(bì)細(xì)胞時,一定(dìng)要注意終止(zhǐ)胰(yí)酶(méi)反應(yīng),防(fáng)止過度消化;最(zuì)好使用專(zhuān)業(yè)的胰酶中和(hé)劑(jì);2)在進(jìn)行(háng)細胞(bāo)離心(xīn)時(shí),使用低轉速長(cháng)時間(jiān)離心,提升細(xì)胞的(dí)存(cún)活(huó)率(shuài);3)選(xuǎn)擇合(hé)適(shì)狀(zhuàng)態的細(xì)胞,一般原(yuán)代細胞可以(yǐ)傳(chuán)1-2次後使(shǐ)用(yòng);盡(jìn)量(liáng)挑選(xuǎn)迭代次數少...
  • 貼壁(bì)細胞培(péi)養(yǎng)和(hé)懸浮(fú)細胞培養的(dí)區別(bié)是什麼(mó)?

    2023-09-13 細(xì)胞(bāo)培(péi)養有兩(liǎng)種基(jī)本(běn)方式,一種是(shì)人工基質上的(dí)單層細(xì)胞(bāo)(貼壁(bì)培養(yǎng)),另一(yī)種是在(zài)培(péi)養基中(zhōng)自由漂(piāo)浮(fú)(懸(xuán)浮培(péi)養)。那(nà)麼(mó)你(nǐ)知道(dào)貼壁細胞(bāo)培(péi)養和懸浮細胞(bāo)培(péi)養(yǎng)的(dí)區別是什麼(mó)嗎?讓我(wǒ)們一(yī)起(qǐ)來(lái)看看吧(bā)!來自(zì)脊椎動物(wù)的大多數細(xì)胞(bāo),除(chú)了造(zào)血細(xì)胞係(xì)和少數其他(tā)細胞(bāo)係,都是(shì)貼(tiē)壁依賴性(xìng)的,必須在經(jīng)過(guò)專門處理(lǐ)以允(yǔn)許(xǔ)細(xì)胞(bāo)粘附和擴散的(dí)合適(shì)基質(zhì)上培養。然而,許多細胞係也(yě)適用於懸浮培養。同樣,大多(duō)數市售昆蟲細胞係(xì)在(zài)貼(tiē)壁(bì)培(péi)養或懸浮(fú)培養中(zhōng)生(shēng)長(cháng)良(liáng)好(hǎo)。懸浮培養的(dí)細(xì)胞(bāo)可以保存在(zài)未(wèi)經組織(zhī)培(péi)養處(chǔ)理(lǐ)的培(péi)養瓶中,但(dàn)隨著(zhuó)培(péi)養體積(jī)與(yǔ)表(biǎo)麵積(jī)的(dí)增(zēng)加...
  • 什麼(mó)是原(yuán)代細(xì)胞培養和細胞生長曲(qū)綫?

    2023-09-13 你(nǐ)知道(dào)什(shí)麼是原(yuán)代細(xì)胞(bāo)培養,和(hé)細胞生(shēng)長(cháng)曲綫嗎?,讓我(wǒ)們一(yī)起(qǐ)來(lái)看(kàn)看吧!一(yī),原(yuán)代(dài)細(xì)胞(bāo)培(péi)養(yǎng)原(yuán)代培(péi)養(yǎng)是指(zhǐ)由體內取出組織或細(xì)胞(bāo)進(jìn)行的首ci培(péi)養(yǎng),也叫(jiào)初代(dài)培養(yǎng)。原代培養(yǎng)離(lí)體時間短,遺傳(chuán)性狀(zhuàng)和(hé)體(tǐ)內(nèi)細胞相似,適於(yú)做(zuò)細胞形態,功能(néng)和分化等研(yán)究。較(jiào)為(wéi)嚴格地說是(shì)指成(chéng)功傳代(dài)之(zhī)前的培養,此時的細胞保(bǎo)持原(yuán)有細胞(bāo)的(dí)基(jī)本(běn)性(xìng)質(zhì),如果是(shì)正常細胞,仍然保留二(èr)倍體數。但(dàn)實(shí)際(jì)上(shàng),通(tōng)常把第(dì)一代(dài)至(zhì)第十(shí)代(dài)以(yǐ)內(nèi)的(dí)培(péi)養細胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養。最chang用(yòng)的(dí)原代培養(yǎng)有(yǒu)組(zǔ)織塊培(péi)養(yǎng)和(hé)分(fēn)散(sàn)細胞(bāo)培養(yǎng)。二,細胞(bāo)生長(cháng)曲綫細胞(bāo)生長(cháng)曲綫是測定(dìng)細(xì)...
  • 熒(yíng)光(guāng)定量PCR的(dí)原理(lǐ)是什麼(mó)?

    2023-09-12 熒光定量(liáng)PCR(Real-timePCR),是指在(zài)PCR擴增(zēng)反應體係中加(jiā)入熒光基團,通過(guò)對擴增反(fǎn)應中每一(yī)個循環產物熒光信號的實時檢測,最後(hòu)通(tōng)過(guò)標(biāo)準曲(qū)綫對(duì)未知(zhī)模板(bǎn)進行定(dìng)量(liáng)分(fēn)析的方(fāng)法(fǎ)。那(nà)麼(mó)你(nǐ)知道(dào)熒(yíng)光(guāng)定量PCR的原(yuán)理是什(shí)麼(mó)嗎(má)?讓(ràng)我們(mén)一(yī)起來(lái)看看吧!以探(tàn)針法熒光定(dìng)量PCR為例(lì):PCR擴增時(shí)在(zài)加(jiā)入(rù)一(yī)對(duì)引物(wù)的同(tóng)時(shí)加入一(yī)個(gè)特(tè)異(yì)性(xìng)的(dí)熒(yíng)光(guāng)探針(zhēn),該(gāi)探(tàn)針兩(liǎng)端分別(bié)標記一(yī)個報告熒(yíng)光基(jī)團(tuán)和一個淬滅熒光基(jī)團。開始(shǐ)時(shí),探(tàn)針完整地(dì)結合在(zài)DNA任意(yì)一條單鏈(liàn)上(shàng),報告基團(tuán)發射(shè)的(dí)熒(yíng)光信號被淬滅基團吸(xī)收(shōu),檢(jiǎn)測(cè)不(bù)到熒(yíng)光(guāng)信(xìn)號...
  • 細胞傳代(dài)的實驗步驟是(shì)什(shí)麼?有何注意(yì)事項?

    2023-09-12 在(zài)細胞(bāo)培養(yǎng)過程中,去除原培養(yǎng)基(jī)並(bìng)將(jiāng)細胞從原培養體係(xì)轉(zhuǎn)移到新(xīn)鮮的培養基(jī)中(zhōng),維持(chí)細胞(bāo)的(dí)活(huó)力(lì)與(yǔ)增(zēng)殖(zhí)。細胞(bāo)傳代既(jì)可以擴(kuò)大(dà)細胞(bāo)培養量,也(yě)能夠(gòu)避免(miǎn)細胞因(yīn)進入(rù)平(píng)台期(qī)而出現生長抑製甚(shèn)至(zhì)死亡的情(qíng)況。那麼(mó)你知道細胞傳(chuán)代(dài)的(dí)實(shí)驗(yàn)步(bù)驟(zhòu)是(shì)什麼嗎(má)?有(yǒu)何(hé)注(zhù)意事項呢?讓我們一起來看看(kàn)吧!一,實驗步(bù)驟1.貼壁細胞(bāo)的傳代(dài):1)倒(dǎo)置顯微鏡(jìng)下(xià)觀(guān)察細(xì)胞(bāo)形態(tài)及密度(dù),評估(gū)細胞的(dí)狀(zhuàng)態,以作為(wéi)傳代比(bǐ)例的參考(kǎo)。2)提前(qián)紫(zǐ)外殺(shā)菌(jūn)(至少30min為(wéi)宜)操作台及(jí)實驗(yàn)材(cái)料(liào)。3)注(zhù)意無菌(jūn)操(cāo)作(zuò),在操作台中(zhōng)吸除(chú)或(huò)倒掉培(péi)養(yǎng)皿內(nèi)舊培(péi)養(yǎng)液(盡可能去...
  • 如何選擇蛋白表達係(xì)統?

    2023-09-11 在蛋白表達(dá)係統的相關(guān)研(yán)究中,從頭合成蛋白(bái)質並(bìng)不是(shì)一(yī)個可(kě)行(háng)的選擇(zé)。因此需要借助(zhù)活(huó)細胞或細胞(bāo)器(qì)用作生(shēng)產和構建(jiàn)蛋白(bái)質(zhì)的工廠。那麼(mó)你(nǐ)知道(dào)該如(rú)何選擇蛋白表達(dá)係統嗎(má)?讓我(wǒ)們一起來看看吧!目前,較為(wéi)主流(liú)的表(biǎo)達(dá)宿主有(yǒu)大腸(cháng)杆菌(jūn)(E.coli),畢赤(chì)酵母(P.pastoris),昆蟲-杆(gān)狀病(bìng)毒(Bac-to-Bac係(xì)統)以(yǐ)及(jí)哺(bǔ)乳動物(wù)細胞係(xì)(CHO,HEK293)等。一,細(xì)菌(jūn)優(yōu)點(diǎn):1.遺傳背景(jǐng)清(qīng)楚(chǔ);2.繁殖快,成本(běn)低(dī),抗汙(wū)染(rǎn)能力強;3.表達量(liáng)高(gāo),表(biǎo)達(dá)產(chǎn)物(wù)分(fēn)離純化相對(duì)簡單,穩(wěn)定(dìng)性好(hǎo);4.商(shāng)品化的載(zǎi)體(tǐ)...
  • 你知道(dào)胎牛(niú)血(xiě)清(qīng)的用途和(hé)應(yīng)用領域嗎?

    2023-09-11 胎牛血(xiě)清是從胎牛(niú)臍(qí)帶(dài)血中(zhōng)提(tí)取的一(yī)種生物(wù)製品(pǐn)。它(tā)是一(yī)種黃褐(hè)色液(yè)體(tǐ),主(zhǔ)要由蛋白質,氨(ān)基酸,碳水(shuǐ)化合(hé)物,脂類,礦物質和生長因子等組(zǔ)成(chéng)。那麼(mó)你知道胎牛(niú)血清(qīng)的(dí)用途和(hé)應用領(lǐng)域(yù)嗎?讓(ràng)我們(mén)一起來(lái)看看吧(bā)!一,細(xì)胞和(hé)組(zǔ)織培(péi)養(yǎng):胎(tāi)牛(niú)血(xiě)清是常(cháng)用的(dí)培養(yǎng)基(jī)補充物之一(yī),提供(gōng)細胞生(shēng)長所(suǒ)需(xū)的(dí)營(yíng)養物質,生長因子和調(tiáo)節(jié)因子。它能夠(gòu)維(wéi)持(chí)細(xì)胞的適(shì)宜(yí)環境(jìng),促(cù)進細(xì)胞的(dí)增殖和分化,並提高(gāo)細胞產(chǎn)量和特定細(xì)胞類型的功(gōng)能。二(èr),疫(yì)苗(miáo)和(hé)生(shēng)物(wù)製品生產:胎牛血(xiě)清在疫(yì)苗,抗體和(hé)生(shēng)物(wù)藥物的生產過(guò)程(chéng)中(zhōng)起著重要(yào)的(dí)作用(yòng)。它(tā)可以(yǐ)作為培養(yǎng)基的補(bǔ)充(chōng)物,...
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