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貼壁細胞傳(chuán)代(dài)的方(fāng)法和注(zhù)意事項
2024-08-09
細胞培(péi)養幾乎(hū)是所(suǒ)有細(xì)胞生(shēng)物(wù)學實驗(yàn)的基(jī)礎(chǔ)。其中，細(xì)胞傳代是(shì)將(jiāng)部分細胞(bāo)分離出(chū)來，重新(xīn)接種到新的培養皿中，使細胞重新(xīn)獲得足夠的營(yíng)養(yǎng)條件(jiàn)和生長空間(jiān)的過程(chéng)。對(duì)於(yú)貼(tiē)壁(bì)生長的(dí)細胞，細胞密(mì)度長(cháng)到80%-90%時(shí)，細胞狀態(tài)最(zuì)好(hǎo)，此時(shí)可(kě)進(jìn)行(háng)細胞傳代。下麵讓我們(mén)一起(qǐ)來看看貼壁細(xì)胞(bāo)傳代(dài)的方法(fǎ)和注意事項吧(bā)！一，貼壁細(xì)胞(bāo)傳代（以T25瓶為例(lì)）1.顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞匯(huì)合度大(dà)於(yú)80%即可(kě)傳(chuán)代；2.將移液管，移(yí)液槍(qiāng)，T25培養瓶(píng)，1ml槍(qiāng)頭(tóu)，PBS溶(róng)液等(děng)放入超淨工作台(tái)，紫外(wài)燈滅菌(jūn)30min後(hòu)再通風(fēng)30min；3...
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細胞(bāo)復(fù)蘇實驗的操作步驟(zhòu)與注(zhù)意事(shì)項(xiàng)
2024-08-08
細胞復蘇是指將(jiāng)凍(dòng)存(cún)在液氮(dàn)或(huò)者-70℃冰箱中的細(xì)胞(bāo)解(jiě)凍(dòng)之後(hòu)重(zhòng)新培養(yǎng)，細胞恢復(fù)生長(cháng)的過(guò)程。當(dāng)恢復(fù)到(dào)常(cháng)溫狀(zhuàng)態時，細胞的(dí)形態(tài)結構(gòu)保(bǎo)持正常，生(shēng)化反即刻恢復(fù)。細(xì)胞復蘇過程升溫(wēn)要快(kuài)，原則(zé)是慢凍快融(róng)，防止(zhǐ)在(zài)解凍過程(chéng)中水(shuǐ)分進入(rù)細胞(bāo)，形(xíng)成冰晶，影響細(xì)胞存(cún)活。下麵讓我們(mén)一(yī)起來看看(kàn)細胞復蘇(sū)實(shí)驗的操(cāo)作(zuò)步(bù)驟與(yǔ)注(zhù)意(yì)事項吧(bā)！一(yī)，操作步驟1.將10ml移液(yè)管，移(yí)液槍，1ml槍頭，50ml離(lí)心管，T25培(péi)養瓶(píng)，酒精(jīng)燈(dēng)，廢(fèi)液(yè)缸(gāng)等(děng)物(wù)品放(fàng)入超(chāo)淨工(gōng)作台，紫(zǐ)外(wài)燈照射30min後(hòu)再通風30min；2.預(yù)熱培養(yǎng)基；3.用(yòng)75...
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ELISA實(shí)驗的常見問(wèn)題(tí)
2024-08-08
ELISA是分子生(shēng)物學(xué)，免疫學和細(xì)胞生(shēng)物學研究(jiū)中常用到的(dí)實驗操作之(zhī)一，相(xiāng)信(xìn)大(dà)家常常會有(yǒu)這樣那樣的實驗問題(tí)。下(xià)麵讓我們一(yī)起(qǐ)來(lái)看(kàn)看ELISA實驗(yàn)的(dí)常見(jiàn)問(wèn)題都有哪(nǎ)些吧(bā)！1.洗板不幹(gān)淨(jìng)解決方法：①充(chōng)分(fēn)洗(xǐ)滌：如果洗板的(dí)時間(jiān)不(bù)夠，會導(dǎo)致抗(kàng)體殘留(liú)，陰(yīn)性對照會顯(xiǎn)色，嘗試延長(cháng)洗(xǐ)板時(shí)間，增(zēng)加洗板頻率，在洗(xǐ)液(yè)中添(tiān)加(jiā)表(biǎo)麵(miàn)活性(xìng)劑Tween-20。在(zài)洗板時要(yào)保(bǎo)證(zhèng)每(měi)步都(dū)洗滌幹淨(jìng)，充分(fēn)拍(pāi)板直(zhí)至孔內(nèi)沒有明顯(xiǎn)的殘留液(yè)體。②避免(miǎn)交叉汙(wū)染：棄去(qù)洗液和(hé)孵育的抗(kàng)體時避(bì)免(miǎn)交(jiāo)叉(chā)汙染，移(yí)液槍頭(tóu)盡(jìn)可(kě)能一(yī)次(cì)性使(shǐ)用(yòng)，拍板的濾紙不要(yào)...
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ELISA實驗操作方(fāng)法
2024-08-08
ELISA(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，酶聯免疫(yì)吸附試驗(yàn))是一(yī)種常(cháng)用的實(shí)驗技術，用於(yú)檢測(cè)和定量分析樣(yàng)品(pǐn)中(zhōng)特定(dìng)抗原或(huò)抗體的(dí)存在。ELISA是(shì)基於免(miǎn)疫(yì)學(xué)原理(lǐ)的一種高(gāo)靈敏度(dù)和(hé)高(gāo)特異性的實驗(yàn)方法。下麵讓我們一(yī)起(qǐ)來(lái)看看(kàn)ELISA實驗操作(zuò)方法(fǎ)吧！ELISA實驗(yàn)通常包(bāo)括以下步驟(zhòu)：1.塗覆：將(jiāng)待(dài)檢(jiǎn)測(cè)的抗(kàng)原或抗體溶(róng)液加入(rù)到微(wēi)孔(kǒng)板(bǎn)(通常是96孔(kǒng)板)中，並(bìng)在孔(kǒng)板(bǎn)表(biǎo)麵(miàn)上形成一層固定的抗(kàng)原或(huò)抗體。這個過(guò)程被稱為塗(tú)覆(fù)。2.阻斷(duàn)：為了防止非特(tè)異性結(jié)合，需要在塗覆後加入(rù)一(yī)...
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細(xì)菌(jūn)活化的操作流程(chéng)
2024-07-10
活(huó)化(huà)就是(shì)將(jiāng)保藏狀態的菌(jūn)種放入適宜的培養(yǎng)基中培養，逐(zhú)級擴(kuò)大(dà)培(péi)養得到純(chún)而(ér)壯(zhuàng)的培養(yǎng)物，即(jí)獲得活力旺(wàng)盛的(dí)，接種數量(liáng)足(zú)夠的培養物菌種發(fā)酵(jiào)有(yǒu)一般(bān)需要(yào)2-3代的復壯(zhuàng)過程，因(yīn)為(wéi)保(bǎo)存(cún)時的(dí)條件(jiàn)往往和培養時(shí)的條件不相同，所(suǒ)以(yǐ)要活(huó)化，讓(ràng)菌種(zhǒng)逐(zhú)漸(jiàn)適(shì)應培養環(huán)境。那麼你(nǐ)知(zhī)道細(xì)菌(jūn)活(huó)化的(dí)操作(zuò)流(liú)程是什(shí)麼(mó)嗎？讓我(wǒ)們一(yī)起來看看(kàn)吧！1.在(zài)無菌操作下(xià)，用(yòng)無菌微量吸(xī)管，從(cóng)已(yǐ)溶(róng)解(jiě)的(dí)管(guǎn)中吸取(qǔ)50μL(或1-2滴)的菌液，滴入(rù)固態(tài)培養(yǎng)基(培養基(jī)編號(hào)及(jí)溫(wēn)度示於(yú)菌株訂購(gòu)單(dān))某(mǒu)一(yī)邊緣(yuán)附近，以(yǐ)劃(huá)綫(xiàn)法(fǎ)接種於(yú)培養基。2.將接種好的(dí)培(péi)養基(jī)置(zhì)...
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細胞(bāo)凋亡的(dí)檢(jiǎn)測方法(fǎ)
2024-07-10
細胞凋(diāo)亡的(dí)過程在(zài)不(bù)同點受(shòu)到(dào)嚴格(gé)調控，因(yīn)此可(kě)以評(píng)估(gū)所涉及的不同蛋白質的活性。由(yóu)於細胞(bāo)凋亡(wáng)和(hé)壞(huài)死的過程可能重(zhòng)疊，因(yīn)此(cǐ)必須通過兩種(zhǒng)不(bù)同的(dí)測定來確認細(xì)胞死(sǐ)亡的機製。下麵讓(ràng)我(wǒ)們一起來看(kàn)看(kàn)細胞凋亡的(dí)檢測方法(fǎ)吧！1.細胞形態學變化用(yòng)光學顯微(wēi)鏡(jìng)觀察蘇木(mù)精和伊(yī)紅染(rǎn)色(sè)的組(zǔ)織切片可以(yǐ)觀察(chá)到凋亡細胞。該方法檢測(cè)的(dí)是處(chǔ)於(yú)凋亡後(hòu)期的細胞，但不(bù)能(néng)識別(bié)處於(yú)凋亡(wáng)早(zǎo)期(qī)的(dí)細胞。透射電(diàn)子顯微(wēi)鏡(TEM)是確(què)認(rèn)細(xì)胞凋(diāo)亡的金(jīn)標(biāo)準。2.DNADNAladdering技術是另(lìng)一種檢測(cè)細胞凋(diāo)亡(wáng)的方(fāng)法(fǎ)，它(tā)使(shǐ)細胞凋亡過程中核酸(suān)內...
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細胞凋亡的機製是(shì)什麼(mó)？
2024-07-10
細胞凋(diāo)亡是(shì)一(yī)種正常(cháng)的基因程序性細(xì)胞死(sǐ)亡(wáng)，其(qí)中(zhōng)衰老細胞在其生命(mìng)周期(qī)結(jié)束(shù)時收縮，其(qí)剩(shèng)餘(yú)片段被吞(tūn)噬而沒有任(rèn)何炎症(zhèng)反應。細(xì)胞凋(diāo)亡的過(guò)程非常復(fù)雜(zá)和復(fù)雜，涉(shè)及(jí)一係(xì)列依賴能(néng)量(liáng)的(dí)分子事件。那麼(mó)你(nǐ)知道細胞凋(diāo)亡的機製是什(shí)麼嗎？讓我(wǒ)們一(yī)起來看看吧！1.外在或死亡(wáng)受體通路啟動(dòng)細(xì)胞凋(diāo)亡的外(wài)在途(tú)徑(jìng)涉(shè)及跨膜(mó)受體介導(dǎo)的相(xiāng)互作(zuò)用(yòng)。這些(xiē)相互(hù)作(zuò)用(yòng)發生在配體及其相應的死(sǐ)亡受體(tǐ)之(zhī)間(jiān)，這些(xiē)受(shòu)體都是(shì)腫瘤(liú)壞(huài)死(sǐ)因子(TNF)家族(zú)的一部(bù)分(fēn)。TNF受體(tǐ)家族(zú)的所有成(chéng)員(yuán)共享(xiǎng)一個共(gòng)同的(dí)富(fù)含(hán)半(bàn)胱氨酸的細(xì)胞(bāo)外(wài)結構域(yù)，該結構域(yù)含(hán)有約(yuē)80個氨...
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什麼(mó)是(shì)細胞凋亡
2024-07-10
細(xì)胞凋亡是一種(zhǒng)正常的基因(yīn)程(chéng)序(xù)性細胞死亡，其中衰老細(xì)胞在其生命周期(qī)結(jié)束(shù)時(shí)收(shōu)縮，其剩餘片段(duàn)被吞(tūn)噬(shì)而(ér)沒(méi)有任(rèn)何炎症反應。下(xià)麵讓我們(mén)一(yī)起(qǐ)來看看什麼(mó)是細(xì)胞凋亡吧！1972年，Kerr，Wyllie和Currie在一(yī)篇論(lùn)文中引入了細胞(bāo)凋(diāo)亡一(yī)詞，以描(miáo)述形(xíng)態(tài)上不(bù)同的(dí)細(xì)胞死亡(wáng)類(lèi)型(xíng)。它由(yóu)一係(xì)列導致細胞形態變(biàn)化或(huò)死亡的(dí)生(shēng)化變化(huà)組成。它導(dǎo)致(zhì)平均成年人每(měi)天有50至700億(yì)個細胞死亡。因(yīn)為細胞會(huì)經(jīng)歷一個(gè)高度調節(jié)的過程(chéng)，以按(àn)程序(xù)從體(tǐ)內清除細胞。大(dà)多數細胞都具有作為(wéi)細胞周(zhōu)期一部分的(dí)細胞(bāo)凋亡的內(nèi)在(zài)機(jī)製。這(zhè)種機(jī)製...
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