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蛋白質純化的原(yuán)理(lǐ)是什麼？
2023-11-30
蛋白純(chún)化是(shì)指通(tōng)過(guò)基因(yīn)工程技術將(jiāng)編碼蛋白的核(hé)酸序(xù)列(liè)導入到宿(sù)主細胞，使(shǐ)其大量表(biǎo)達，再(zài)使用(yòng)適當的(dí)純化(huà)方法(fǎ)將(jiāng)其在(zài)體外純化(huà)出來，從而(ér)獲得高純度(dù)，活性(xìng)和(hé)產(chǎn)量(liáng)的蛋白質(zhì)。蛋白質表達係統可以分為原核表(biǎo)達係(xì)統和真核表(biǎo)達係統兩大(dà)類(lèi)。那麼(mó)你知(zhī)道(dào)蛋白(bái)質純(chún)化的(dí)原(yuán)理是(shì)什麼(mó)嗎？讓我們一(yī)起(qǐ)來看(kàn)看吧！一(yī)，乳(rǔ)糖操縱子的負調(tiáo)控(kòng)在沒有(yǒu)乳(rǔ)糖存在(zài)時，lac操(cāo)縱(zòng)子處於(yú)阻遏狀態，此時，I序列表達(dá)Lac阻遏蛋(dàn)白與(yǔ)O序(xù)列結合(hé)，阻(zǔ)礙(ài)RNA聚(jù)合酶(méi)與P序(xù)列(liè)結合(hé)，抑(yì)製轉錄啟動(dòng)。當(dāng)有乳(rǔ)糖存在時，乳糖進入細胞，經β-半(bàn)乳糖苷酶催化(huà)，轉變(biàn)為(wéi)異...
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瓊(qióng)脂糖凝膠(jiāo)電泳的(dí)常(cháng)見問題(tí)有哪(nǎ)些(xiē)？
2023-11-29
瓊脂糖凝(níng)膠電泳是(shì)根(gēn)據核酸（DNA或(huò)RNA）分(fēn)子大(dà)小(xiǎo)來(lái)分離(lí)和(hé)識別(bié)物質的技(jì)術(shù)。那麼你知道瓊(qióng)脂糖凝(níng)膠電泳的(dí)常見問(wèn)題有哪(nǎ)些嗎？讓(ràng)我們(mén)一起來(lái)看看吧(bā)！一(yī)，同樣大小(xiǎo)的DNA一起(qǐ)跑電泳條帶(dài)不一(yī)樣(yàng)大DNA條(tiáo)帶不一樣大，本質上(shàng)是DNA在(zài)凝膠(jiāo)中(zhōng)的(dí)遷(qiān)移率不一樣(yàng)，有(yǒu)的(dí)跑得(dé)快，有的(dí)慢(màn)，通(tōng)常情況同(tóng)樣大小的DNA，遷移(yí)率(shuài)是一(yī)樣的(dí)，條帶位(wèi)置也(yě)會一(yī)樣(yàng)。但遷移率也(yě)受很多因素影(yǐng)響(xiǎng)，例(lì)如(rú)DNA的(dí)構(gòu)象。例(lì)如(rú)環狀超(chāo)螺(luó)旋(xuán)結(jié)構(gòu)的DNA，和(hé)同等大小的(dí)綫性DNA（例如單位點酶(méi)切後的質粒），前者的遷移(yí)率(shuài)要(yào)高，表現(xiàn)出(chū)來(lái)就是看上去(qù)超螺...
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細(xì)胞(bāo)計數通用(yòng)步驟(zhòu)有(yǒu)什麼？有何注意事(shì)項(xiàng)？
2023-11-29
細(xì)胞(bāo)計數是指(zhǐ)對細(xì)胞數量進行(háng)定量測定(dìng)的方法。在細(xì)胞(bāo)培(péi)養(yǎng)實驗中，通過細胞(bāo)計(jì)數(shù)來(lái)確定(dìng)細胞(bāo)培(péi)養的密度和數量(liáng)，可(kě)以(yǐ)掌(zhǎng)握細胞(bāo)生長的(dí)情況。同(tóng)時，細胞(bāo)計(jì)數(shù)也(yě)是衡量不同(tóng)實(shí)驗(yàn)條件下細(xì)胞(bāo)生長情況(kuàng)的重要(yào)指標之(zhī)一(yī)。那麼(mó)你知(zhī)道(dào)細(xì)胞計數通(tōng)用步(bù)驟(zhòu)有什麼嗎(má)？有(yǒu)何(hé)注意事(shì)項(xiàng)呢？讓我們一(yī)起(qǐ)來看(kàn)看吧！一，細胞計(jì)數的(dí)通用方(fāng)法1.以(yǐ)貼(tiē)壁(bì)生(shēng)長(cháng)的(dí)細(xì)胞(bāo)為例(lì)，消(xiāo)化後的細胞充(chōng)分(fēn)重懸(xuán)吹散，取一部分轉(zhuǎn)移至(zhì)幹淨(jìng)的EP管內(nèi)，例如1mL;2.使(shǐ)用酒(jiǔ)精棉(mián)球輕輕擦(cā)拭計(jì)數板(bǎn)表(biǎo)麵和(hé)蓋玻片，把後(hòu)者(zhě)的邊緣(yuán)微微(wēi)濕(shī)潤，然(rán)後小心蓋在計數板(bǎn)的(dí)正中間，邊(biān)緣要(yào)能覆(fù)...
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你知道什麼是緩衝溶液嗎？
2023-11-28
你(nǐ)知(zhī)道什(shí)麼是(shì)緩(huǎn)衝溶液嗎？讓(ràng)我們(mén)一起(qǐ)來(lái)看(kàn)看(kàn)吧！緩(huǎn)衝溶(róng)液是許多生化(huà)反應，生產(chǎn)，實驗過(guò)程(chéng)中(zhōng)的重要(yào)溶液(yè)，對穩定(dìng)溶液(yè)的(dí)酸(suān)鹼度(dù)有(yǒu)重要(yào)的(dí)影響。最常見的幾(jī)種緩衝體係(xì)有磷(lín)酸(suān)鹽(yán)緩衝溶液(yè)，硼(péng)酸(suān)鹽緩衝溶液(yè)，三(sān)羥(qiǎng)甲(jiǎ)基(jī)氨(ān)基(jī)甲烷（簡(jiǎn)稱(chēng)Tris）-HCl緩(huǎn)衝溶液(yè)，羥(qiǎng)yi基哌qin乙磺酸(suān)（供注(zhù)射(shè)用）（簡稱HEPES）緩(huǎn)衝(chōng)溶液。對於絕大多數(shù)生物製劑（如(rú)疫苗，抗體，ADC偶聯藥物，脂(zhī)質體等）而言，實驗操(cāo)作(zuò)，實際生(shēng)產以(yǐ)及生物體(tǐ)內(nèi)的(dí)生化(huà)反應等(děng)都需要(yào)在(zài)特(tè)定的(dí)pH值範圍內才能正常有效地進行(háng)，從而得(dé)到(dào)準確的實(shí)驗結(jié)論或發揮最...
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如何選擇(zé)緩衝溶(róng)液？
2023-11-28
三羥甲基氨(ān)基(jī)甲烷（Tris）是(shì)一種(zhǒng)應(yīng)用(yòng)非常(cháng)廣(guǎng)泛(fàn)的(dí)有(yǒu)機(jī)試(shì)劑(jì)。它(tā)及其衍(yǎn)生物(wù)被(bèi)廣泛應用(yòng)於生(shēng)物化學和分子(zǐ)生物學實驗中的緩衝(chōng)液(yè)的製(zhì)備(bèi)，可(kě)用(yòng)於製作(zuò)藥物(wù)，有機(jī)合(hé)成，生(shēng)物緩衝劑等(děng)。其中(zhōng)在生化實(shí)驗(yàn)中(zhōng)，許多(duō)蛋(dàn)白質及核(hé)酸(suān)相關的(dí)實驗都(dū)需要用Tris作(zuò)為生(shēng)物(wù)緩衝劑。那麼(mó)你知道(dào)該(gāi)如(rú)何(hé)選擇緩(huǎn)衝溶(róng)液嗎(má)？讓我們(mén)一(yī)起來看(kàn)看吧！TBS即Tris緩(huǎn)衝鹽水，是(shì)Tris-HCl緩(huǎn)衝(chōng)鹽(yán)溶(róng)液(yè)，為(wéi)等(děng)滲(shèn)鹽溶液加(jiā)Tris-HCl緩衝(chōng)液。因(yīn)為Tris鹼(jiǎn)的(dí)鹼(jiǎn)性較(jiào)強，所以可以隻用(yòng)這(zhè)一(yī)種緩衝體(tǐ)係(xì)配製(zhì)pH範圍由酸(suān)性到(dào)鹼(jiǎn)性(xìng)的(dí)大範圍(wéi)pH值(zhí)的緩(huǎn)...
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細(xì)胞消化的方法有哪(nǎ)些？
2023-11-27
細胞(bāo)消化(huà)的(dí)方法(fǎ)有哪些？我們的細(xì)胞(bāo)在(zài)培養時(shí)大部分會(huì)以貼(tiē)壁(bì)的形式(shì)生長，它們(mén)在機(jī)體內時(shí)，也是與(yǔ)其他(tā)細(xì)胞或(huò)者細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合(hé)的(dí)。細胞培(péi)養過程(chéng)中(zhōng)使(shǐ)用的wan全(quán)培養(yǎng)基中(zhōng)的血(xiě)清(qīng)，含(hán)有許多(duō)帶(dài)陽(yáng)性(xìng)電(diàn)荷的(dí)促(cù)細(xì)胞附著因子(zǐ)(層黏連蛋(dàn)白(bái)Laminine，纖(xiān)維連(lián)接蛋白Fibronectin等胞(bāo)外基(jī)質(zhì)），能(néng)幫助細(xì)胞附著於帶(dài)陰性(xìng)電(diàn)荷(hé)的底物(wù)上(shàng)，並(bìng)形成連(lián)接，貼(tiē)壁伸展。使細胞解除這(zhè)種附著，就(jiù)是(shì)細胞消化。那麼你知(zhī)道細(xì)胞消化的方(fāng)法有(yǒu)哪(nǎ)些嗎？讓我(wǒ)們(mén)一起來(lái)看(kàn)看吧(bā)！一，機械(xiè)消化法(fǎ)直(zhí)接用培(péi)養基吹打或使(shǐ)用細胞刮刀，通過(guò)外力使(shǐ)細胞...
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ELISA檢測時樣本實驗準備步(bù)驟有什(shí)麼？
2023-11-27
在收(shōu)集樣(yàng)本前都必(bì)須(xū)有一個完(wán)整(zhěng)的(dí)計劃(huá)，必須(xū)清(qīng)楚要檢(jiǎn)測的成(chéng)份(fèn)是否足(zú)夠穩定。那(nà)麼(mó)你知(zhī)道ELISA檢測(cè)時(shí)樣本(běn)實驗準(zhǔn)備步驟都有什麼(mó)嗎？讓我們(mén)一起來(lái)看(kàn)看吧(bā)！1.血清室溫(wēn)血液自然凝(níng)固10-20分鐘後(hòu)，離心20分(fēn)鐘(zhōng)左(zuǒ)右(yòu)轉/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中(zhōng)如有沉澱形成(chéng)，應再(zài)次(cì)離(lí)心。2.血漿應根(gēn)據標本(běn)的要求(qiú)選擇EDTA，檸檬(méng)酸鈉或肝素作為抗(kàng)凝劑(jì)，混合(hé)10-20分(fēn)鐘(zhōng)後(hòu)，離(lí)心(xīn)20分鐘(zhōng)左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔(zī)細收(shōu)集(jí)上(shàng)清。保(bǎo)存過(guò)程中(zhōng)如有(yǒu)沉澱(diàn)形(xíng)成，應再次離心(xīn)。3.尿(niào)液用無菌(jūn)管(guǎn)收(shōu)集。離心20分鐘左...
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阻(zǔ)斷(duàn)ELISA與液相阻斷(duàn)ELISA有(yǒu)什(shí)麼(mó)區別(bié)？
2023-11-27
你知道阻斷ELISA與(yǔ)液(yè)相阻(zǔ)斷ELISA有什麼區(qū)別(bié)嗎(má)？讓我們一起來看看(kàn)吧！一(yī)，本質不同間接的酶標抗體是(shì)二(èr)抗，與待(dài)檢抗體(tǐ)結合(hé)；阻斷酶標(biāo)抗體(tǐ)是一抗(kàng)，與(yǔ)抗(kàng)原(yuán)結(jié)合(hé)。間(jiān)接中底物(wù)降(jiàng)解(jiě)的量與(yǔ)抗體(tǐ)量相等(děng)，阻(zǔ)斷底物降解量與抗體。二，實(shí)驗結果不(bù)同酶(méi)聯(lián)免(miǎn)疫(yì)吸(xī)附(fù)試驗：是(shì)酶免疫(yì)測定技(jì)術(shù)中應用(yòng)zui廣的(dí)技術(shù)，其(qí)基本(běn)方(fāng)法是(shì)將已知的抗(kàng)原或(huò)抗體吸(xī)附在固相載(zǎi)體(聚(jù)苯乙烯(xī)微(wēi)量反應(yīng)板(bǎn))表麵，使酶標(biāo)記(jì)的抗(kàng)原(yuán)抗體反應在固相(xiāng)表(biǎo)麵進行，用洗滌法(fǎ)將液相中的(dí)遊(yóu)離(lí)成分洗(xǐ)除(chú)，常用的ELISA法(fǎ)有(yǒu)雙(shuāng)抗體夾(jiā)心法和(hé)間(jiān)接(jiē)法。OD值(zhí)不(bù)同(tóng)是因(yīn)...
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