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你知道(dào)什麼是瓊(qióng)脂糖凝膠電泳嗎？
2023-10-25 你知道什(shí)麼是你知(zhī)道什麼(mó)是(shì)瓊(qióng)脂糖凝(níng)膠電泳嗎(má)？讓(ràng)我們一起(qǐ)來看看吧(bā)！一(yī)，瓊脂糖凝膠(jiāo)的特點(diǎn)核酸(suān)分子(zǐ)是(shì)兩(liǎng)性解(jiě)離(lí)分(fēn)子(zǐ)，在(zài)高於其等電點的(dí)電泳緩衝(chōng)液(yè)中(zhōng)，其鹼(jiǎn)基不解(jiě)離，而磷酸基(jī)團全部解(jiě)離(lí)，核(hé)酸分子(zǐ)因(yīn)而帶負電(diàn)荷，電泳(yǒng)時(shí)向(xiàng)正極遷移(yí)。瓊脂糖主(zhǔ)要從海洋植物瓊(qióng)脂(zhī)中提(tí)取而來(lái)並經(jīng)糖(táng)基(jī)化(huà)修飾，為(wéi)一(yī)種聚(jù)合鏈綫性分子(zǐ)，使用瓊(qióng)脂糖凝膠(jiāo)作(zuò)為電泳(yǒng)支持(chí)介質，發揮(huī)分子篩功(gōng)能，使(shǐ)得大小(xiǎo)和(hé)構(gòu)象(xiàng)不(bù)同的(dí)核(hé)酸(suān)分子的(dí)遷移(yí)率出(chū)現(xiàn)較大差異，從而(ér)達到分(fēn)離(lí)的(dí)目的。因此，目(mù)前(qián)多用瓊(qióng)脂(zhī)糖為電泳(yǒng)支(zhī)持(chí)物(wù)進(jìn)行平板(bǎn)電泳(yǒng)，其(qí)優點(diǎn)如下。（1）瓊脂糖凝膠電泳操...
瓊脂(zhī)糖(táng)凝膠(jiāo)電泳實驗(yàn)的試(shì)驗方(fāng)法是(shì)什麼？注意(yì)事(shì)項有(yǒu)什麼(mó)？
2023-10-25 你知道瓊(qióng)脂糖凝(níng)膠電泳實(shí)驗(yàn)的(dí)實(shí)驗(yàn)方(fāng)法是(shì)什麼(mó)嗎(má)？有什麼注(zhù)意(yì)事(shì)項呢？讓(ràng)我們(mén)一起(qǐ)來(lái)看(kàn)看吧(bā)！一，瓊脂(zhī)糖凝(níng)膠電泳(yǒng)實(shí)驗方法1.擇適(shì)合樣品(pǐn)預(yù)期(qī)片段大小的瓊脂(zhī)糖凝(níng)膠(jiāo)濃度(dù)百(bǎi)分(fēn)比(bǐ)。將瓊脂(zhī)糖(táng)粉末與用於運行(háng)凝膠的(dí)相(xiāng)同類(lèi)型(xíng)的緩(huǎn)衝液(yè)（TAE）結(jié)合起(qǐ)來，加(jiā)熱(rè)使(shǐ)混合(hé)物融化，避免沸(fèi)騰(téng)。2.選擇(zé)所(suǒ)需(xū)尺寸(cùn)的(dí)凝膠澆(jiāo)注模具和梳(shū)子，為(wéi)樣品和(hé)marker提(tí)供足夠數(shù)量的孔，以(yǐ)及容納(nà)每個待裝(zhuāng)樣(yàng)品數(shù)量(liáng)的孔容(róng)量(liáng)。3.膠(jiāo)凝固(gù)後，將(jiāng)凝(níng)膠放(fàng)入(rù)電泳儀(yí)中(zhōng)，電泳(yǒng)液沒(méi)過凝膠，根據加入量的(dí)多(duō)少，決定(dìng)混(hùn)合多少(shǎo)ul的lodingbuffer，將樣(yàng)液混...
如(rú)何(hé)選擇(zé)DNA提取(qǔ)方法
2023-10-25 DNA的(dí)提取可(kě)以(yǐ)簡單(dān)的分為(wéi)裂解(jiě)和(hé)純(chún)化兩大步驟，裂解是破壞(huài)樣品(pǐn)細胞(bāo)結構，從(cóng)而使樣(yàng)品中的(dí)DNA遊離(lí)在(zài)裂解體係中的過(guò)程，純化(huà)則(zé)是(shì)使(shǐ)DNA與(yǔ)裂解體係中的(dí)其它成(chéng)分(fēn)，如(rú)蛋(dàn)白質，鹽及其它(tā)雜(zá)質分離(lí)的(dí)過(guò)程。那(nà)麼該如何選擇DNA提(tí)取(qǔ)方(fāng)法呢？讓我們一(yī)起(qǐ)來看看吧(bā)！一，酚(fēn)氯(lǜ)仿(fǎng)抽提(tí)法(fǎ)酚(fēn)氯仿抽提(tí)是去除蛋白(bái)質的有效(xiào)手段(duàn)，但如(rú)果蛋白質含量超過了其(qí)飽和度，裂(liè)解體係(xì)中(zhōng)的蛋白質(zhì)就不會(huì)被(bèi)一次性(xìng)去除(chú)，需(xū)要進(jìn)行多次(cì)反復抽提，而(ér)每(měi)次的(dí)抽提(tí)均(jūn)會導(dǎo)致(zhì)核酸(suān)的損失(shī)。酚氯(lǜ)仿(fǎng)抽提的(dí)優(yōu)勢是(shì)成本(běn)低廉(lián)，對實(shí)驗條(tiáo)件(jiàn)要(yào)求較(jiào)低。二，高(gāo)鹽沉澱(diàn)法高(gāo)鹽(yán)...
熒(yíng)光原位雜(zá)交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步(bù)驟是什(shí)麼(mó)？
2023-10-24 熒(yíng)光原(yuán)位(wèi)雜(zá)交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門新(xīn)興的(dí)分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術，是(shì)20世紀80年代(dài)末期在原(yuán)有的(dí)放射(shè)性原位雜(zá)交技(jì)術(shù)的基(jī)礎上(shàng)發展(zhǎn)起來的(dí)一種非(fēi)放射性(xìng)原(yuán)位雜(zá)交(jiāo)技(jì)術(shù)。那(nà)麼你知道(dào)熒光(guāng)原位雜交（FISH）的(dí)實(shí)驗步驟是(shì)什(shí)麼嗎？讓(ràng)我們(mén)一起(qǐ)來(lái)看看吧(bā)！一(yī)，實(shí)驗材料(liào)準備(bèi)1.實(shí)驗(yàn)用(yòng)具(jù)及(jí)材料(liào)（1）人(rén)的MyoD1（MYF3)基(jī)因探，人(rén)外周血中期染色(sè)體細胞標(biāo)本；（2）指甲油，甲酰胺(àn)，氯化鈉，檸檬酸(suān)鈉，*，吐(tǔ)溫20等(děng)；（3）恒溫水(shuǐ)浴(yù)鍋，培養箱，染(rǎn)色缸(gāng)，載玻...
蛋(dàn)白表(biǎo)達(dá)的常(cháng)見問(wèn)題(tí)有哪(nǎ)些？
2023-10-24 蛋(dàn)白表(biǎo)達實驗的時(shí)，有時(shí)候實驗會覺得參考(kǎo)實驗方(fāng)法和克(kè)隆的蛋白基(jī)因(yīn)序(xù)列(liè)wan全沒有問(wèn)題(tí)，但蛋(dàn)白電泳(yǒng)就是沒有結果(guǒ)。下(xià)麵讓我們一起來看看(kàn)蛋白(bái)表達的(dí)常見問題有哪些吧！1，載體(tǐ)構建(jiàn)錯誤，很多克隆新人經(jīng)常(cháng)弄錯讀(dú)碼框。比如Qiagen的pQE係(xì)列(liè)載體，其(qí)克(kè)隆位點常(cháng)有一兩(liǎng)個鹼(jiǎn)基的區別(bié)；另(lìng)外(wài)有(yǒu)些(xiē)酶產生(shēng)粘端(duān)有(yǒu)些(xiē)酶(méi)產(chǎn)生(shēng)平端，這(zhè)些(xiē)都容易導致讀碼(mǎ)框(kuàng)錯誤(wù)，從(cóng)而(ér)表達(dá)不(bù)出(chū)來。2，宿主(zhǔ)菌選(xuǎn)擇不(bù)當，不(bù)同的(dí)宿主(zhǔ)菌(jūn)其基(jī)因型是不(bù)一(yī)樣的。有(yǒu)些(xiē)經(jīng)過特殊(shū)修飾的(dí)載體(tǐ)，或者(zhě)特(tè)殊(shū)用途的(dí)載(zǎi)體，或(huò)者有(yǒu)特殊啟(qǐ)動子(zǐ)的載體(tǐ)，必須選擇(zé)合(hé)適的宿(sù)...
PCR反(fǎn)應(yīng)體(tǐ)係(xì)主要是什(shí)麼？
2023-10-23 你知(zhī)道PCR反(fǎn)應(yīng)體係(xì)主要包(bāo)含那(nà)些嗎？讓我(wǒ)們一起來(lái)看(kàn)看吧！一，模板（template)模板即擴(kuò)增用的DNA，可以是(shì)任何(hé)來源DNA(如基因(yīn)組DNA，質(zhì)粒DNA等(děng))或RNA（如總RNA，mRNA，tRNA，rRNA，病毒RNA等(děng)），但(dàn)必須(xū)符合兩個條件：一是純(chún)度必須(xū)較(jiào)高，二是濃(nóng)度不(bù)能太高以免抑製。模板是待擴(kuò)增的(dí)目(mù)的基因(yīn)或特異片段(duàn)，如(rú)診斷病人是否攜(xié)帶有突變基(jī)因時，其模(mó)板就(jiù)是(shì)提取的病人血(xiě)液(yè)中的DNA或(huò)RNA片(piàn)段。PCR對模(mó)板(bǎn)DNA的(dí)純度(dù)不要(yào)求很高(gāo)，但應盡(jìn)量不(bù)含有對PCR反應有(yǒu)抑製(zhì)作用的雜...
PCR技術的基本原理，各步驟的目的是什麼？
2023-10-23 你(nǐ)知道PCR技(jì)術(shù)的基(jī)本原理，各(gè)步(bù)驟(zhòu)的目的是(shì)什麼嗎(má)？讓我們一起來看看吧！一(yī)，PCR技術(shù)基(jī)本原理(lǐ)PCR是一(yī)種選(xuǎn)擇性體(tǐ)外快(kuài)速擴(kuò)增(zēng)DNA片(piàn)段(duàn)的(dí)方(fāng)法(fǎ)。在體(tǐ)外(wài)以類似(sì)於細(xì)胞內DNA的半(bàn)保(bǎo)留(liú)復製過程(chéng)，以擬擴增(zēng)的模板DNA分子，與模板DNA互補的寡核苷(gān)酸引(yǐn)物(wù)，DNA聚(jù)合(hé)酶(méi)，4種dNTP及適合的(dí)緩衝體(tǐ)係組(zǔ)成的反應(yīng)體係，經(jīng)過重復地變性一(yī)退火一(yī)延伸三步(bù)，擴(kuò)增新的目的(dí)DNA鏈(liàn)，這(zhè)個(gè)過(guò)程通過(guò)控(kòng)製反(fǎn)應體(tǐ)係的(dí)溫(wēn)度(dù)來(lái)實現。PCR包含下(xià)列(liè)三步反應：1，變(biàn)性(denaturation)將反(fǎn)應(yīng)體係(xì)混合物(wù)經加(jiā)熱(rè)至(zhì)94...
如(rú)何(hé)選擇(zé)免疫(yì)組(zǔ)化(huà)中的一抗(kàng)？
2023-10-20 免(miǎn)疫組化實驗看(kàn)似容易，但(dàn)真想(xiǎng)把結果做漂亮(liàng)，還(huán)是需要(yào)花(huā)上(shàng)很(hěn)長一段時(shí)間去積(jī)累(léi)和摸索(suǒ)經驗。一(yī)味(wèi)按(àn)照(zhào)網(wǎng)上操作(zuò)流程(chéng)來(lái)做(zuò)，結果(guǒ)往往並(bìng)不(bù)理(lǐ)想，最終結果未能達到預期的效果。那麼如何選(xuǎn)擇免(miǎn)疫(yì)組化實驗(yàn)中的一抗呢(ní)？讓(ràng)我(wǒ)們一起(qǐ)來(lái)看(kàn)看吧！一，單(dān)克(kè)隆和多(duō)克隆抗體(tǐ)的選擇存(cún)在於抗(kàng)原(yuán)表(biǎo)麵的，決定(dìng)抗原(yuán)特異(yì)性的(dí)特(tè)殊(shū)化學基(jī)團(tuán)稱(chēng)為抗原決定(dìng)簇，又稱抗原表位(wèi)。一個(gè)抗原可以有(yǒu)一種或(huò)多(duō)種不(bù)同的抗原表位，每(měi)種(zhǒng)表位隻(zhī)有一種(zhǒng)抗原(yuán)特異性。用一種包含(hán)多(duō)種抗(kàng)原(yuán)決(jué)定簇的抗原免疫動物(wù)，可刺(cì)激機體多個B細胞克(kè)隆產(chǎn)生(shēng)針對多種抗原表位(wèi)的(dí)抗體，就(jiù)是(shì)...

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